硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）在前列腺癌中的表达及生物学功能的研究
发布时间：2020-07-03 00:29
【摘要】：一、背景前列腺癌(prostate cancer,PCa)是世界范围内最常诊断的癌症之一,严重危害男性的健康,寻找前列腺癌治疗的分子靶点成为了当下的热点。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin interacting protein,TXNIP)作为抑癌因子,在人类多种肿瘤中被下调,但是目前尚未对TXNIP参与前列腺癌发生发展及具体的生物学功能进行深入而全面的研究。二、目的研究TXNIP在前列腺癌组织中的表达,并探究TXNIP与前列腺癌的临床和病理参数之间的相关性。进一步通过体外细胞实验,探索TXNIP的过表达对前列腺癌PC-3细胞增殖、克隆形成能力,细胞周期、凋亡,迁移和侵袭能力的影响,为揭示TXNIP在前列腺癌发生发展中的生物学作用及为前列腺癌的分子治疗提供实验基础。三、方法1.收集50例前列腺癌组织标本(以49例良性前列腺增生组织为对照组),采用免疫组织化学染色法检测组织中TXNIP的表达水平,分析TXNIP的表达水平与前列腺癌临床病理参数的相关性;2.通过慢病毒转染技术,构建TXNIP过表达PC-3细胞。分为空白对照组(CON),阴性对照组(LV-NC)和过表达TXNIP组(LV-TXNIP),而后采用qRT-PCR和Western Blot验证转染效率;3.细胞稳定过表达TXNIP后,前列腺癌PC-3细胞的增殖能力采用CCK-8和克隆形成实验检测,细胞凋亡和细胞周期分布采用流式细胞技术检测;细胞迁移和侵袭能力采用划痕实验和Transwell小室实验检测。四、结果1.TXNIP在前列腺癌组织中的阳性表达率为36.0%(18/50),显著低于良性前列腺增生组织79.6%(39/49),差异有统计学意义(P0.05)。前列腺癌组织中TXNIP的阳性表达率与患者术前前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)、TNM分期、Gleason评分显著相关(P0.05),而与年龄无关。2.慢病毒转染PC-3细胞后,采用嘌呤霉素药物筛选,通过qRT-PCR和Western Blot方式验证转染效率。结果显示,LV-TXNIP组mRNA和蛋白表达量相对LV-NC组和CON组显著升高(P0.001)。3.与CON组和LV-NC组对比,LV-TXNIP组PC-3细胞的克隆形成、增殖能力,侵袭和迁移能力显著降低;此外,LV-TXNIP组细胞总凋亡率显著升高,细胞周期阻滞于G0/1期,差异均具有统计学意义(P0.05)。五、结论TXNIP在前列腺癌组织中显下调,且TXNIP阳性表达与前列腺癌患者PSA、TNM分期和Gleason评分显著相关;过表达TXNIP抑制前列腺癌PC-3细胞的生长能力、侵袭和迁移能力,并促进细胞凋亡和周期阻滞于G0/1期。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25
【图文】：
为了研究ＴＸＮＩＰ在前列腺组织中的表达差异，本实验采用了免疫组织化学染逡逑色的方法，检测了邋ＴＸＮＩＰ蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生组织中的表达情况。逡逑结果显示，ＴＸＮＩＰ蛋白表达定位于细胞质，见图１－１。在前列腺癌组织中，ＴＸＮＩＰ逡逑呈阴性表达为主，细胞质为透明无色，阳性表达率为３６．０％邋（１８／５０）；在良性前逡逑列腺增生组织中，ＴＸＮＩＰ多为强阳性表达，为弥漫片状棕褐色，阳性表达率为７９．邋６％逡逑（３９／４９），前列腺癌组织中ＴＸＮ１Ｐ蛋白的阳性表达率显著低于良性前列腺增生逡逑组织（户＜０．０５），见表１－１。逡逑Ａ逦ＢＰＨ逦ＰＣａ逦％逡逑Ｎｅｙａｔｉｖｅ邋［逦＾．厂逦一逦一－…逡逑Ｖ＇．．．．／逦，价逦，逦＂卜邋一一邋丁逡逑—逦■如）逦Ｖ邋．＇－邋Ｕ．Ｉ＇邋逦邋士逡逑图１－１邋ＴＸＮＩＰ在前列腺癌组织中表达下调。Ａ．免疫组织化学染色显示ＴＸＮＩＰ在良性前列腺逡逑增生和前列腺癌组织中的表达。Ｂ．邋４９例良性前列腺增生和５０例前列腺癌组织中ＴＸＮＩＰ免逡逑疫组织化学染色评分结果。ＴＸＮＩＰ在不同前列腺组织阳性表达率的比较采用卡方检验，逡逑＜０．０５．逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｌｏ
逑为了进一步验证慢病毒转染效率，我们采用ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ的方法在蛋白水平逡逑上检测ＴＸＮＩＰ的表达。如图２－１Ｃ，以ｐ－ａｃｔｉｎ为内参蛋白，ＣＯＮ组蛋白质相对逡逑表达量为（０．４０±０．０５）、１＾－l枺鹤榈鞍字氏喽员泶锪课ǎ埃矗
本文编号：2738899
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25
【图文】：
为了研究ＴＸＮＩＰ在前列腺组织中的表达差异，本实验采用了免疫组织化学染逡逑色的方法，检测了邋ＴＸＮＩＰ蛋白在前列腺癌和良性前列腺增生组织中的表达情况。逡逑结果显示，ＴＸＮＩＰ蛋白表达定位于细胞质，见图１－１。在前列腺癌组织中，ＴＸＮＩＰ逡逑呈阴性表达为主，细胞质为透明无色，阳性表达率为３６．０％邋（１８／５０）；在良性前逡逑列腺增生组织中，ＴＸＮＩＰ多为强阳性表达，为弥漫片状棕褐色，阳性表达率为７９．邋６％逡逑（３９／４９），前列腺癌组织中ＴＸＮ１Ｐ蛋白的阳性表达率显著低于良性前列腺增生逡逑组织（户＜０．０５），见表１－１。逡逑Ａ逦ＢＰＨ逦ＰＣａ逦％逡逑Ｎｅｙａｔｉｖｅ邋［逦＾．厂逦一逦一－…逡逑Ｖ＇．．．．／逦，价逦，逦＂卜邋一一邋丁逡逑—逦■如）逦Ｖ邋．＇－邋Ｕ．Ｉ＇邋逦邋士逡逑图１－１邋ＴＸＮＩＰ在前列腺癌组织中表达下调。Ａ．免疫组织化学染色显示ＴＸＮＩＰ在良性前列腺逡逑增生和前列腺癌组织中的表达。Ｂ．邋４９例良性前列腺增生和５０例前列腺癌组织中ＴＸＮＩＰ免逡逑疫组织化学染色评分结果。ＴＸＮＩＰ在不同前列腺组织阳性表达率的比较采用卡方检验，逡逑＜０．０５．逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｌｏ
逑为了进一步验证慢病毒转染效率，我们采用ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ的方法在蛋白水平逡逑上检测ＴＸＮＩＰ的表达。如图２－１Ｃ，以ｐ－ａｃｔｉｎ为内参蛋白，ＣＯＮ组蛋白质相对逡逑表达量为（０．４０±０．０５）、１＾－l枺鹤榈鞍字氏喽员泶锪课ǎ埃矗
本文编号：2738899
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