RKI-1447对TGF-β1诱导尿道成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响及机制

发布时间：2020-07-07 14:24

【摘要】：目的:本实验通过研究Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)抑制剂RKI-1447对外源性TGF-β1诱导的大鼠尿道成纤维细胞的增殖、迁移、细胞外基质合成、胶原酶抑制因子及细胞骨架蛋白表达的影响,为临床应用ROCK抑制剂治疗和预防尿道狭窄形成提供实验依据。方法:原代培养大鼠尿道成纤维细胞并鉴定。实验分为三大组,包括正常组,对照组(予10μg/L TGF-β1处理细胞)及实验组(予10μg/L TGF-β1+1,2,4,8,16μmol/L RKI-1447处理细胞)。用MTT比色法检测细胞活力;用Transwell小室细胞迁移实验检测细胞迁移能力变化;用Western印迹法检测各组I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表达量。结果:TGF-β1能诱导大鼠尿道成纤维细胞增殖及迁移,能诱导I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表达。与对照组相比,实验组尿道成纤维细胞增殖及细胞迁移能力下降;随着加入的RKI-1447的浓度升高,实验组I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、TIMP-1、α-SMA、p-MLC、ROCK-1的表达逐渐减少。结论:RKI-1447可抑制外源性TGF-β1诱导的大鼠尿道成纤维细胞的增殖、迁移、细胞外基质成分I型和III型胶原蛋白的合成以及细胞中胶原酶抑制因子TIMP-1、细胞骨架蛋白α-SMA、p-MLC的表达。它在防治尿道狭窄形成中的作用值得进一步研究。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R695
【图文】：

图 1.尿道成纤维细胞波形蛋白免疫荧光鉴定（400×）7 对 TGF-β1 诱导的尿道成纤维细胞增殖的结果显示，与正常组相比，经 10μg/L TGF-β1 处nm 吸光度（OD）值升高，刺激了成纤维细胞生长（间 24h 组中，当 RKI-1447 浓度为 1μmol/L 时，OD（表 1）；当药物浓度达到 2μmol/L 时，OD 值降低药物浓度的升高，对细胞增殖的抑制作用逐渐增强学意义（表 1、图 2，P<0.05）。间 48h 组中，RKI-1447 对 TGF-β1 诱导的尿道成纤随药物浓度的升高其抑制作用逐渐增强（表 1、图间（24h、48h）抑制率曲线（图 2），可得知在同一 24h 抑制率；经计算得 48h 半抑制浓度（IC50）为

组别 24h 48h正常组 0.560±0.007 0.698±0.006对照组 0.826±0.032*1.090±0.008*1μmol/L 干预组 0.807±0.013 0.799±0.034#2μmol/L 干预组 0.783±0.007#0.748±0.009#4μmol/L 干预组 0.721±0.014#0.646±0.019#8μmol/L 干预组 0.638±0.021# %

本文编号：2745227