预灌洗对大鼠肾缺血再灌注损伤及肾内巨噬细胞亚型表达的影响

发布时间：2020-07-07 21:58

【摘要】：目的:预灌洗拟缺血肾以清除肾血管内残留细胞群及其他损伤性物质,探究预灌洗对肾脏功能、组织损伤的影响,以及肾内巨噬细胞及其M1、M2亚型的表达情况。方法:健康SD雄性大鼠18只,分为假手术组(Sham)、缺血再灌注损伤组(IR)、预灌洗+缺血再灌注损伤组(PI+IR)(6只/组)。Sham:开腹后仅行左、右肾蒂的游离及右肾去除;IR;夹闭左肾蒂使之缺血60min后再恢复灌注24h,并去除右肾;PI+IR组:生理盐水预灌洗左肾以清除肾血管残留细胞等,余同IR组。术后24h收集血清及左肾用于检测血清肌酐(Scr)、尿素(BUN)水平及肾脏病理、炎性细胞浸润情况(HE染色);按试剂盒说明步骤检测血清及肾脏过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;IHC-P法检测肾脏低氧、凋亡、增殖相关蛋白,巨噬细胞及其相关趋化蛋白的表达(HIF-1α、Caspase3、PCNA、CD68、iNOS、IL-10、TNF-α、MIF、MCP-1);RT-PCR法检测MIF、MCP-1m RNA含量;WB法检测Caspase3、PCNA、TNF-α、MCP-1、CD68、iNOS、CD206的表达。结果:(1)18只模型存活16只,死亡2只,补做2只,最终死亡率10%。(2)病理结果:Sham组无明显病理损伤;IR组损伤较重,肾小管结构破坏、排列紊乱伴间质水肿及大量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞肿胀、脱落甚至坏死;PI+IR组肾小管结构及间质破坏较轻,伴少量炎性细胞浸润。病理评分:IR组病理评分明显高于Sham组(P0.05);与IR组比较,PI+IR组病理评分降低(P0.05)。(3)肾功能:Scr、BUN水平在Sham组较低,IR组较之显著升高(P0.05);与IR组比较,PI+IR组Scr、BUN有所降低(P0.05)。(4)CAT、SOD:Sham组CAT含量较低,SOD含量较高;与Sham组比较,IR组CAT水平升高,SOD水平降低(P0.05);与IR组比较,PI+IR组CAT、SOD水平均明显升高(P0.05)。(5)HIF-1α、Caspase3、PCNA:在Sham组表达较低,在IR组表达明显上调(P0.05);与IR组比较,HIF-1α、Caspase3在PI+IR组表达下调(P0.05),PCNA在PI+IR组表达明显上调(P0.05)。(6)MCP-1、MIF蛋白及其m RNA含量、TNF-α蛋白表达:在Sham组表达较低,在IR组明显上调(P0.05);与IR组比较,在PI+IR组的表达降低(P0.05)。(7)CD68+巨噬细胞数量及其蛋白表达:在Sham组表达较低,在IR组表达上调(P0.05);与IR组相较,二者在PI+IR组的表达降低(P0.05)。(8)iNOS、CD206、IL-10:在Sham组表达较低,在IR组表达上调(P0.05);与IR组比较,iNOS在PI+IR组表达降低(P0.05),CD206及IL-10在PI+IR组表达明显增加(P0.05)。结论:(1)预灌洗可明显改善RIRI模型肾脏的病理与功能损伤。(2)预灌洗可促进RIRI模型肾脏抗氧化功能及肾小管上皮细胞增殖修复,改善缺氧微环境及减轻炎症反应程度。(3)预灌洗可减少RIRI模型肾组织内巨噬细胞的浸润,减少巨噬细胞向促炎性M1亚型的极化,增加其向促进抗炎性M2亚型的极化。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R692
【图文】：

pared with Sham Group P＜0.05,#Compared with IR Group P＜0.05.图 2 各组大鼠 Scr、BUN 水平比较Fig.2 The Comparison of surem creatinine and urea levels among the three 洗对肾脏病理学的影响

注：A：Sham B：IR C：PI+IR图 3 各组大鼠肾组织HE染色（×400）Fig.3 Renal tissue by HE stains among the three groups (×400)2.3.2 病理损伤评分结果

Note:*Compared with Sham Group P＜0.05,#Compared with IR Group P＜0.05.图 5 各组大鼠血清、组织 CAT 及组织 SOD 水平比较Fig.5 The Comparison of CAT and SOD levels among the three groups2.5 预灌洗对肾脏缺氧、细胞凋亡、增殖相关蛋白表达的影响2.5.1 IHC-P 法检测 HIF-1α、Caspase3、PCNA 蛋白的表达

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本文编号：2745660