逆行灌注法对兔移植肾MDA、SOD表达影响的实验研究

发布时间：2020-07-25 18:38

【摘要】：目的建立新西兰兔同种异体原位肾移植模型,采用经肾动脉顺行持续低温灌注与经肾静脉逆行持续低温灌注的两种方法保存兔移植肾并行肾移植手术,观察两组术后血清肌酐、尿量、移植肾组织病理、移植肾组织中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平,初步探讨不同灌注方法对供肾质量的影响,为临床扩大使用边缘供肾提供新的策略和思路。方法1.建立热缺血损伤后同种异体原位肾移植动物模型:供体新西兰兔左侧肾动脉阻断45min形成供肾热缺血损伤,采用顺行持续低温灌注与逆行持续低温灌注两种不同方法灌注2小时后,将其原位移植到受体,移植完成后切除受体右肾,术后使用环孢素A抗排斥,以此来完成实验模型的制作。2.健康成年新西兰雄性兔60只,购买于南华大学动物实验室,体重2-3kg。采用随机数字表法将兔分为两组,顺行持续低温灌注组(A组)与逆行持续低温灌注组(B组)每组30只,再于A、B两组组内随机分为供体和受体两组,每组各15只。比较顺行灌注与逆行灌注两种不同灌注组受体新西兰兔术后第一天、术后第三天、术后第五天的血清肌酐水平及尿量情况;观察术后第五天移植肾组织HE染色病理改变,并用分光光度法检测移植肾组织MDA含量、SOD活力表达情况。结果1.血清肌酐变化情况:A组(顺行灌注组)术后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分别为(398.36±37.28)umol/L、(318.97±18.34)umol/L、(178.01±9.44)umol/L;B组(逆行灌注组)术后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分别为(417.51±34.28)umol/L、(330.54±20.72)umol/L、(186.21±13.81)umol/L。逆行灌注组术后血清肌酐值与顺行灌注组术后血清肌酐值进行比较无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。2.尿量变化情况:A组(顺行灌注组)术后第1天、第3天、第5天尿量分别为(74.60±5.55)ml、(93.72±8.89)ml、(137.58±9.79)ml;B组(逆行灌注组)术后第1天、第3天、第5天尿量分别为(71.18±5.79)ml、(88.16±6.84)ml、(130.99±12.11)ml。逆行灌注组术后尿量与顺行灌注组术后尿量进行比较无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。3.移植肾组织HE染色病理情况:A组(顺行灌注组)、B组(逆行灌注组)术后第五天均可见肾小球及周围毛细血管内有少量微血栓物质形成;肾小管管腔轻度扩大;间质有少许充血水肿和炎症细胞分布;肾脏组织结构基本清晰。4.采用分光光度法检测移植肾组织MDA含量表达情况:A组(顺行灌注组)与B组(逆行灌注组)术后第五天MDA含量分别为(6.65±0.60)nmol/mgprot和(7.02±0.55)nmol/mgprot。逆行灌注组术后MDA含量与顺行灌注组术后MDA含量进行比较,P0.05,差异不具有统计学意义。5.采用分光光度法检测移植肾组织SOD活力表达情况:A组(顺行灌注组)与B组(逆行灌注组)术后第五天SOD活力分别为(369.35±35.37)U/mgprot和(349.13±31.96)U/mgprot。逆行灌注组术后SOD活力与顺行灌注组术后SOD活力进行比较无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。结论逆行灌注法不仅同顺行灌注法一样可以保护移植肾的功能,而且还可以作为肾动脉畸形、损伤的移植肾灌注不良时的一种补救灌洗措施。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R699.2
【图文】：

正常新西兰兔左肾

术前禁食 12h，自由饮水，避免影响术中操作和利于术后快速康复。术前 10 分钟将 3mg/kg 肝素注入血液达到全身肝素化。2.3.2 术前麻醉采用 20%乌拉坦按 5ml/kg 剂量经耳缘静脉注射进行全身麻醉，将新西兰兔仰卧于手术台上，头用兔头固定夹固定，四肢用绳套固定，用 70%酒精将手术器械浸泡消毒，手术区域常规用备皮刀备皮、络合碘消毒 3 遍、铺无菌手术单。2.3.3 移植供肾缺血模型沿腹部正中线作切口，依次切开皮肤、肌肉，打开腹腔 ，两侧组织用拉钩牵拉固定，用湿纱布覆盖腹腔脏器并向右侧推开，显露腹腔血管及左侧腹膜后肾脏。沿左肾外侧缘打开后腹膜，用湿棉签及玻璃分针仔细分离肾周脂肪与筋膜，游离左侧肾脏动脉、静脉至起始部，用 7-0 细丝线分别在肾脏动、静脉起始部予以结扎，并记录 45min 热缺血时间。可见肾脏颜色由红变暗，建立热缺血损伤供肾模型，模拟临床 DCD 肾脏热缺血过程。

管呈 15-30 度角用 24G 密闭式静脉留置针穿刺，见回血后，降低角度再将穿刺针推进少许，取出针芯后固定留置针，连接静脉输液器。用显微剪刀在靠近肾动脉起始结扎处将提起的肾动脉剪断，做灌注的流出口。将含有肝素的冷藏（0-4℃）高渗枸橼酸盐嘌呤溶液（HCA 液）500ml 通过静脉输液器向肾静脉端进行逆行持续灌注，设定灌注流速为 10-15ml/min，灌注压力为 50cmH2O。灌注过程中用冰生理盐水（0-4℃）持续冷敷肾脏，用棉签自肾周向肾门轻抚肾脏，并用 50ml注射器将流出的液体及时抽吸干净。灌注过程中可见供肾不断变白，流出液由红色转为清亮，并持续到规定时间为止(整个过程约 2 小时)。供肾灌注满意后，分离左肾脂肪及筋膜，电凝并结扎左肾上腺静脉及精索静脉等交通分支。游离输尿管直至近膀胱处剪断，注意保留部分脂肪组织以利于血供。将肾动脉（或肾静脉）穿刺针取出，并将肾动、静脉在起始处剪断，用 9-0尼龙线在静脉开口处缝合一针用以标记，将完全游离左肾迅速取出并置入肾脏保存液中保存备用。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 郑传东;逆行灌注保护心肌的研究现状和发展[J];中国体外循环杂志;2003年03期

2 黄健斌;逆行灌注的应用进展[J];国外医学.心血管疾病分册;1998年01期

3 方海宁;谭伟;吴锋耀;罗又桥;许乃健;曹辉庆;赖纪昌;;低温体外循环心肌逆行灌注下双瓣膜置换术的临床研究[J];广西医科大学学报;2006年04期

4 黄健斌;全身逆行灌注应用进展[J];福建医药杂志;1997年02期

5 BarnerHB;SchaperJ;赵强;;冷停跳液逆行灌注后心肌超微结构评价[J];国外医学.心血管疾病分册;1993年04期

6 谢晓勇,何巍;逆行灌注心脏不停跳对心肌的保护[J];广西医科大学学报;2005年04期

7 林辉,冯旭,曾建业,莫安胜,贺榜福,郑宝石;逆行灌注心脏不停跳法对犬心肌的保护作用[J];中华实验外科杂志;2003年06期

8 赵青,崔复霞,管玉龙,李治安;彩色多普勒血流显像在深低温循环逆行灌注脑保护实验研究中的血流监测作用[J];中国医学影像技术;2002年10期

9 杨建峰,高立兵,徐振海;逆行灌注抢救主动脉大量进气一例[J];中华麻醉学杂志;2001年08期

10 王志成;我国眼动脉逆行灌注技术研究跻入世界先进行列[J];今日科技;1999年07期

相关会议论文 前9条

1 狄冬梅;张晓膺;蒋南清;钱永祥;高克柔;;上腔静脉逆行灌注技术在急性夹层动脉瘤手术中的应用[A];第八届华东六省一市胸心血管外科学术会议论文汇编[C];2005年

2 胡滨;侯生才;李辉;王洋;李彤;张振葵;苗劲柏;傅毅立;;LPD液顺行逆行灌注在肺移植术中的肺保护作用[A];中华医学会第六次全国胸心血管外科学术会议论文集（胸外科分册）[C];2006年

3 乔会煌;任传根;陈忠孝;徐象党;陈成春;;大鼠静脉系统逆行灌注成像研究[A];中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编[C];2013年

4 唐令凤;杨康;张玉霞;廖克龙;王海东;;上腔静脉逆行灌注在深低温停循环脑保护中的作用[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年

5 赵青;崔复霞;李治安;管玉龙;;彩色多普勒血流显像在深低温循环经上腔静脉逆行灌注脑保护实验研究中的血流监测作用[A];2002年全国医学影像技术学术会议论文汇编[C];2002年

6 高长青;李伯君;肖苍松;吴扬;马晓辉;;改良Bentall手术的技术探讨[A];全国心脏瓣膜外科学术会议论文集[C];2005年

7 梅举;张宝仁;郝家骅;徐志云;邹良健;于伟勇;王志农;王连才;;主动脉瓣心内膜炎合并瓣周脓肿的外科治疗[A];全国心脏瓣膜外科学术会议论文集[C];2005年

8 胡滨;侯生才;李辉;张振葵;;LPD液对无心跳供体肺的保护作用[A];中华医学会第六次全国胸心血管外科学术会议论文集（胸外科分册）[C];2006年

9 姚志发;张庆华;张临杰;黎京芳;唐玉荣;宁晓华;李咏梅;向桂玉;;改进供心保护防止冠状血管病变的临床研究[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年

相关博士学位论文 前3条

1 李旭;脑脊液生化指标监测下远端主动脉灌注、脑脊液引流及静脉逆行灌注对降主动脉阻断手术中脊髓缺血损害保护作用的实验与临床研究[D];福建医科大学;2007年

2 林宝泉;经下腔静脉逆灌对腹腔重要脏器保护作用的实验研究[D];第二军医大学;2011年

3 姜萍萍;涎腺局部调节由防龋疫苗诱导的免疫应答的研究[D];山东大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 易丽明;逆行灌注法对兔移植肾MDA、SOD表达影响的实验研究[D];南华大学;2019年

2 王力;逆行灌注法对兔移植肾EGF、MPO表达影响的实验研究[D];南华大学;2019年

3 李斯润;经典原位肝移植术逆行灌注改良法的临床实验研究[D];福建医科大学;2015年

4 谢晓勇;逆行灌注心脏不停跳对减轻体外循环炎性反应的研究[D];广西医科大学;2005年

5 朱奎;肾盂逆行灌注联合肾周冰水降温在后腹腔镜肾部分切除术中对肾低温保护的应用研究[D];蚌埠医学院;2013年

6 李安洁;冠状静脉窦逆行灌注VEGF对兔心肌梗死模型心室肌细胞L型钙电流的影响[D];遵义医学院;2010年

7 吴星欣;骨髓间充质干细胞联合碱性成纤维细胞生长因子促进心肌梗死后心脏功能修复的研究[D];首都医科大学;2015年

8 刘怀普;低温NMDA受体拮抗剂MK-801逆行灌注对猪脊髓损伤的保护作用[D];中南大学;2013年

9 朱有才;胸主动脉夹层动脉瘤的手术治疗[D];浙江大学;2004年

10 杨胜壮;心脏不停跳对重度主动脉瓣狭窄并左心室肥厚心肌保护作用的研究[D];广西医科大学;2014年

本文编号：2770207