TNAP在心脏、肾脏纤维化中的作用及机制

发布时间：2020-07-31 09:22

【摘要】：第一部分:TNAP在心脏、肾脏纤维化中表达上调目的:探讨TNAP在心脏及肾脏纤维化中的表型变化。方法:采用结扎冠状动脉前降支的方法构建大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)诱导的心脏纤维化模型;采用结扎左侧输尿管的方法构建小鼠单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)诱导的肾脏纤维化模型。MI大鼠分别获取心肌梗死后1天,3天,7天,14天,28天心肌组织,于液氮中保存。Western Blot检测心肌TNAP及α-SMA表达。UUO小鼠10天后处死并获取左侧肾脏组织。Western Blot及免疫组化检测肾脏组织TNAP表达。结果:①心梗后左室α-SMA及TNAP表达随心梗时间有逐渐上调趋势。在心肌梗死后14天,心肌α-SMA、TNAP表达达到高峰,心梗后28天反而下降;②与假手术组相比,UUO组TNAP表达显著增高(p0.001)。结论:TNAP在心、肾纤维化中表达上调,提示TNAP可能参与心脏及肾脏纤维化过程。第二部分:抑制TNAP对心脏纤维化的影响目的:探讨抑制TNAP对心脏纤维化的影响及可能机制。方法:大鼠随机分为3组,每组8只:假手术组(Sham)、心肌梗死+盐水注射组(MI+Saline)和心肌梗死+TNAP抑制剂组(MI+Tetra)。在心梗前28天,给予大鼠Tetra(11 mg·kg-1·day-1)或等体积生理盐水腹腔注射,于心梗第14天处死。超声心动图检测心功能和心脏病理改变。Western blot 方法测定 Collagen I,α-SMA,TGF-β1 和 TNAP 表达。免疫组织化学染色方法检测心肌TNAP、α-SMA和TGF-β1表达。结果:TNAP在心梗后心脏中表达增高,其分布与心梗后胶原增生分布区域一致(P0.05)。TNAP抑制剂(Tetra)可显著抑制心脏TNAP表达,降低心梗诱导的胶原沉积、TGF-β1及α-SMA表达,同时改善心梗后心脏重塑及心功能改变,包括FS,EF,LVIDs以及ⅣSs(P均0.05)。结论:抑制TNAP可能通过抑制肌成纤维细胞转化及胶原合成的方式改善心肌纤维化,同时改善心梗诱导的心脏重塑及心功能变化。第三部分:抑制TNAP对肾脏纤维化和钙化的影响目的探讨抑制TNAP对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾脏纤维化和钙化的影响。方法SPF级C57BL/6雄性小鼠24只,随机分为3组,假手术组(n=8),UUO+生理盐水组(n=8),UUO+Ins16 组(n=8)。UUO 模型建立后第10日处死小鼠,取术侧肾组织。采用天狼星红染色、Masson染色、茜素红S染色分别检测肾脏胶原沉积及钙化程度。Western Blotting检测肾脏TGF-β1,TNAP表达。免疫组织化学染色法检测肾脏TNAP 表达。RT-PCR 检测肾脏 TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表达。结果与假手术组相比,UUO+生理盐水组肾脏胶原面积百分比显著增加,以Ⅰ型胶原为主,钙盐沉积显著增加,TNAP,TGF-β1表达显著增加,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1 mRNA表达显著增加(P均0.05)。与UUO+生理盐水组相比,UUO+Ins16组小鼠肾脏胶原面积,钙盐沉积,TGF-β1,TNAP,TGF-β1、BMP2、Col1a1、Col2a1mRNA表达均显著降低(P均0.05)。结论 采用Ins16抑制TNAP具有抗UUO诱导的肾脏纤维化及钙化作用,其机制可能与调控TGF-β1、Collagen Ⅰ、BMP2、Collagen Ⅱ表达水平有关。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R54;R692
【图文】：

逦逦逡逑１．３统计学方法逡逑所有实验数据均由ＳＰＳＳ邋１２．０统计分析。计量资料正态分布使用均数±标准差逡逑表示。多组间比较采用单因素方差分析，以ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。逡逑２结果逡逑２．１心梗后ＴＮＡＰ及ａ－ＳＭＡ表达逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＳＤ大鼠心肌梗死后不同时间点心肌ａ－ＳＭＡ及ＴＮＡＰ表逡逑达，发现心梗后左室ａ－ＳＭＡ及ＴＮＡＰ表达随心梗后时间推移有逐渐上调趋势。在逡逑心肌梗死后１４天，心肌ａ－ＳＭＡ、ＴＮＡＰ表达达到高峰，心梗后２８天反而下降（图逡逑２．１）。逡逑４－１逦．．逡逑－－逦－ｎ－

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本文编号：2776283