LARS2调控ABCA1诱导肾透明细胞癌脂代谢重编程的机制研究

发布时间：2020-07-31 16:36

【摘要】：目的:肾透明细胞癌其胞质富含脂质,具有脂代谢重编程的特征。本课题组前期全基因组测序发现肿瘤中组织中亮氨酰-tRNA合成酶(mitochondrial leucyl-tRNA synthetase 2,LARS2)基因突变,但其对肾透明细胞癌脂代谢作用尚未阐明。因此,本研究旨在验证通过脂代谢组学分析发现的关键基因三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette,sub-family A,ABCA1),在肾透明细胞癌脂代谢重编程的的表达,探索LARS2调控ABCA1诱导肾透明细胞癌脂代谢再变编程的可能机制,进一步阐明LARS2在肾透明细胞癌脂代谢重编程过程中的功能和作用机制,为研究肾透明细胞癌的发生机制提供资料。方法:(1)对肾透明细胞癌组织切片和配对癌旁组织切片进行进行油红染色(2)选择本课题组前期构建的LARS2过表达的稳转细胞和对照细胞,以及LARS2低表达的稳转细胞及其对照细胞,进行脂代谢组学检测,寻找到显著差异脂质-胆固醇酯。随后送检60对肿瘤组织和配对癌旁组织再次进行脂代谢组学分析,进一步确认。根据结果,利用生物信息学预测分析软件,寻找到编码调控胆固醇酯代谢的关键基因ABCA1;(3)在上述细胞系中采用qT-PCR的方法同时检测LARS2和ABCA1表达,并在90对肿瘤和配对癌旁组织中验证;利用试剂盒检测细胞株、肿瘤组织及配对癌旁组织的胆固醇酯浓度。依肿瘤组织表达LARS2水平高低分组,比较二组之间ABCA1表达水平差异及胆固醇酯水平。结果:肾透明细胞癌富含脂质,染色明显。脂代谢组学共鉴定超过1000个脂类物质变化,涉及30亚类,提示肾透明细胞癌脂代谢重编程。结果分析显示肿瘤组织和细胞内胆固醇酯(ChE)显著增高,经生物信息学预测,三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)为调控ChE表达关键酶基因。LARS作为抑癌基因在肿瘤中失活,过表达LARS2的肿瘤细胞株的ABCA1表达水平下调,胆固醇酯含量降低(P0.01)。肿瘤组织ABCA表达水平显著高于配对瘤旁正常肾脏组织,高表达ABCA1的肿瘤组织胆固醇酯含量高于低表达者(P0.001);而LARS2表达水平高的肿瘤组织其ABCA1表达显著下调,胆固醇酯含量也显著低于LARS2表达低的组织(P0.01)。结论:肾透明细胞癌脂代谢重编程,以胆固醇酯富集为主要特点。ABCA1为负责调控胆固醇酯代谢关键酶的基因,其高表达与胆固醇酯富集相关。LARS2作为抑癌基因在ccRCC中失活,过表达LARS2的细胞株其ABCA1表达降低,胆固醇酯含量低于对照细胞株及敲低LARS2的稳转细胞株。肿瘤组织内低表达LARS2者ABCA 1表达水平上调,胆固醇酯含量随之增高,提示因LARS2失活后诱导ABCA1上调,进而促进肾透明细胞癌脂代谢重编程。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.11
【图文】：

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逦解放军医学院硕士学位论文评分，Ｒ２Ｙ接近１，Ｑ２均大于０．６，模型稳固可靠。在ＯＰＬＳ－ＤＡ模型中，以ＶＩＰ同时满足Ｐ〈0．邋０５为显著指标，共选出如图所示显著性差异脂质（表４），随后差异脂质进行了聚类分析（图４）、相关分析（图５）以及脂质亚类变化分析（６）通过比较和分析Ａ－Ｂ、Ａ－Ｃ、Ｂ－Ｃ以及Ｂ－Ｄ四组数据及图表，我们最终发现固醇酯这一差异脂质在不仅差异变化明显，而且差异可靠性高。同样，在组织本中，共鉴定１０６４个脂类化合物，涉及３２个亚类。结合四个组组间、组内对数据分析，以Ｂ－Ａ对比分析为例，结果如图７、８所示，我们在肿瘤－健康组织本的分析中发现ＣｈＥ表达具有差异性，且符合细胞样本分析结果。逡逑

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