circPRKD3抑制前列腺癌细胞增殖的作用及机制研究

发布时间：2020-08-03 16:54

【摘要】：目的:阐明circPRKD3抑制前列腺癌细胞增殖的作用及机制。方法:1.收集前列腺癌与前列腺增生组织标本进行组织学方向的检测,选取差异性表达明显的环状RNA进一步实验。2.通过RT-PCR技术检测前列腺癌、前列腺增生组织中circPRKD3的表达水平,通过免疫荧光染色原位杂交技术在细胞水平比较circPRKD3在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达水平。3.体外实验:适宜环境中培养正常前列腺上皮细胞和前列腺癌细胞,通过RT-PCR和免疫荧光染色原位杂交实验检测RWPE-1细胞和前列腺癌细胞中circPRKD3的表达水平。4.将PC3细胞作为前列腺癌细胞的代表进一步实验。在体外适宜环境中培养PC3细胞并在细胞内过表达circPRKD3,然后采用实时定量PCR、Western blot、Transwell、创伤愈合实验等实验方法检测circPRKD3的作用。5.设计可以低表达circPRKD3的实验方法,并在前列腺癌细胞内低表达circPRKD3,随后进行定量PCR、Western blot实验、Transwell实验、创伤愈合实验验证circPRKD3的作用。结果:1.检测前列腺癌、前列腺增生组织中存在的差异性环状RNA。随机选取了三例人体前列腺癌组织和与其配对的前列腺增生组织,在这些标本中总共发现了15个不同的circRNA,选取差异性较大circPRKD3作为研究对象。2.circPRKD3在前列腺癌组织中低表达。实时定量PCR、FISH实验证实:与前列腺增生组织相比较,circPRKD3在前列腺癌组织中的表达水平明显下调。3.circPRKD3在前列腺癌细胞中低表达前列腺癌细胞中circPRKD3表达水平均低于前列腺上皮细胞,PC3细胞差异性最明显,以PC3细胞为代表进一步实验。免疫荧光实验显示:circPRKD3在前列腺癌细胞中表达量下调。综上结果表明:circPRKD3在前列腺癌细胞中的表达水平显著下调。4.过表达circPRKD3能够抑制前列腺癌细胞的体外增殖和迁移能力。PCR、Transwell实验、创伤愈合实验、Western Blot实验结果表明:过表达circPRKD3能够抑制前列腺癌细胞的体外增殖与迁移。5.敲低circPRKD3能够促进前列腺癌细胞的体外增殖和迁移能力。PCR、Transwell实验、创伤愈合实验、Western Blot实验结果表明:敲低circPRKD3能够促进前列腺癌细胞的体外增殖与迁移。结论:1.circPRKD3存在于正常的前列腺组织中,并且其在前列腺癌组织表达下调。2.circPRKD3是一种与前列腺癌细胞增殖与迁移有关的基因。3.过表达circPRKD3能够抑制前列腺癌细胞的增殖与迁移。4.敲低circPRKD3能够促进前列腺癌细胞的增殖与迁移。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.25
【图文】：

图 1 标本中中差异性表达的 circRNA（circPRKD3）。g.1Analysis of circRNA（circPRKD3）expression in clinical tishical clustering analysis shows distinguishable circRNA expression pros of cancerous and adjacent tissues. (T1/T2/T3 for prostate cancer and P1/ adjacent nontumorous tissues). Each column represents the expression prsample, and each row corresponds to a circRNA. ‘‘Red’’ indicates higher end ‘‘green’’indicates lower expression level.

环形图,环形

图2鉴别和验证circPRKD3为环形RNA。PRKD3 was identified and verified as a circular RNrgent) primers were used to detect circPRKD3 via RT-PCRcRNAs in cDNA but not genomic DNA (gDNA). GAPin base pairs. confirmed head-to-tail splicing of circPRKD3.

30图 3 circPRKD3 在前列腺癌组织的表达下调。.3 circPRKD3 was downregulated remarkably in clinical tiR analysis results of hsa_circ_0001296(circPRKD3) expressiong divergent primers. **P < 0.01 vs. BPH, n = 21.ybridization (ISH) of circPRKD3 (green) combined with nuclear-spue) in clinical tissues. Scale bars = 50μm.

【相似文献】