肝细胞生长因子激活物抑制因子-1基因对前列腺癌PC-3细胞自噬的影响

发布时间：2020-08-11 16:16

【摘要】：目的本研究将肝细胞生长因子激活物抑制因子-1(HAI-1)基因作为目的基因构建重组质粒,转染前列腺癌PC-3细胞,通过检测一系列自噬相关指标,观察HAI-1基因对前列腺癌PC-3细胞自噬功能的影响,初步探讨其发生的可能机制,为前列腺癌的发生、发展提供新的理论依据。方法将构建好的重组质粒pcDNA3.1(+)-HAI-1转染到前列腺癌PC-3细胞中,并设转染质粒pcDNA3.1(+)empty vector为空载体组,无质粒转染组为阴性对照组。转染72h后收集细胞,提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR检测HAI-1、自噬标志物Beclin 1 mRNA表达情况,Western印迹方法检测三组LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比率和Beclin 1蛋白表达水平的变化,并通过透射电子显微镜和细胞免疫荧光观察细胞超微结构和自噬水平。结果RT-PCR结果显示,空载体组与阴性对照组相比较,前列腺癌PC-3细胞HAI-1、Beclin 1的mRNA表达并无差异,说明转染空载质粒对细胞并无影响。阴性对照组与实验组相比较,细胞转染重组质粒pcDNA3.1(+)-HAI-1后自噬相关基因Beclin 1的mRNA表达水平明显增强;Western印迹结果显示,与空载体组和阴性对照组相比较,转染pcDNA3.1(+)-HAI-1质粒的实验组LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白比率变大,Beclin 1蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);透射电子显微镜观察可见,实验组的前列腺癌PC-3细胞胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,并可通过荧光显微镜观测到荧光标记的自噬体和自噬溶酶体。结论HAI-1基因可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬,干预前列腺癌细胞自噬活性可能是治疗前列腺癌的潜在途径。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25
【图文】：

图 2 DNA 电泳检测 HAI-1 在 PC-3 细胞中的表达 1 为空载体组；2 和 4 为阴性对照组；3 为；M 为 DNA makerAI-1 对前列腺癌 PC-3 细胞自噬的影响.Western 印迹分析Beclin 1 的表观分子量是 60 kDa，LC3 I 的表观分子量是 16 kDa，LC3 II 的表观量是 14 kDa，以 β-Actin（表观分子量为 42 kDa）作为内参。检测各组细胞中自噬 LC3 II/LC3 I 蛋白表达的比率以及 Beclin 1 蛋白的相对表达水平。Western blot 结示，与空载体组及阴性对照组相比较，前列腺癌 PC-3 细胞转染重组质粒NA3.1(+)-HAI-1 后，LC3 II/LC3 I 蛋白表达的比率升高，Beclin 1 的蛋白表达明强，差异有统计学意义（*P < 0.05），如图 3。

图 3 三组自噬相关蛋白的 Western blot 结果 A：LC3 II/LC3 I 蛋白表达的比率；B：Beclin 1 的白表达（注：*两组间比较 P < 0.05）2.细胞超微结构观察

PC-3细胞内自噬颗粒的观察（电镜，标尺为500nm）A：实验组；B：阴性对照组

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本文编号：2789286