SLC22A14、SPAG6与特发性弱精子症关系的研究

发布时间：2020-08-19 08:10

【摘要】：近年来,受环境污染、生活压力等因素影响,不孕不育的发病率与日俱增。弱精子症、无精子症、畸形精子症等成为困扰男性生育健康的重要疾病。其中弱精子症是男性不育最常见的病因,由多种因素导致,包括器质性疾病,如泌尿系统感染、隐睾、精索静脉曲张,也包括不良的生活习惯,如熬夜、吸烟、酗酒、刺激饮食等因素。弱精子症是由多种遗传因素和环境因素引起的一种复杂的疾病,其根本原因不明确。目前已经确定了一些特定的基因突变与弱精子症相关,但其他导致男性精子活力缺陷的因素仍然需要探索与研究。弱精子症(asthenozoospermia AZS)即精子活力异常,前向运动能力减弱。按照2010年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提供的精液分析参数标准,正常活力的精液即精子浓度≥15×10~6ml~(-1),精子前向运动比率(Progressive Motility,PR)≥32%;弱精子症即精子浓度≥15×10~6ml~(-1),精子前向运动比率(PR)32%。临床上将病因和发病机制尚不清楚的弱精子症称为特发性弱精子症。精子活力的来源主要依赖于精子尾部鞭毛的摆动,其原理是鞭毛内部轴丝中的双联微管在ATP的作用下,不断地发生分离、结合,使双联微管之间产生滑动;同时双联微管周围的各种附属结构形成滑动阻力,把支臂产生的纵向作用力转化成横向弯曲动力,使鞭毛形成浪状波摆动,促使精子向前移动,从而穿透宫颈粘液到达受精部位,再穿过透明带,进入卵细胞,完成整个受精过程。由于精子的高度复杂性,任何外部因素或内部因素的改变都可能导致鞭毛结构和能量代谢的异常,使精子运动受到影响,导致男性生育缺陷。目前,关于男性特发性弱精子症相关基因和蛋白的研究较为广泛,为了进一步了解男性特发性弱精子症的发病机制和途径,本实验利用RT-PCR和Western Blot这两种实验方法对特发性弱精子症患者和正常成年男性精子中SLC22A14和SPAG6mRNA和蛋白的表达进行检测,探寻精子中SLC22A14和SPAG6的表达情况,从而为男性生殖健康的诊疗提供帮助。材料与方法1研究对象收集2016年9月-11月期间郑州大学第三附属医院生殖男科门诊特发性弱精子症患者(年龄22~37岁)精液标本50例为特发性弱精子症组,以及同期河南省人类精子库的健康供精志愿者(年龄20~39岁)的合格精液样本50例为正常对照组。标本提供者需满足无各种传染病,身体状态良好,排除生殖道感染、生殖激素异常、精索静脉曲张、免疫因素等。受试者禁欲时间2~7 d,采用手淫法收集精液至干燥广口无菌杯中,放置37℃水浴箱孵育,30-60 min内完全液化。正常对照组精子浓度≥50×10~6/ml,精子前向运动百分率≥32%,特发性弱精子症组精子浓度≥50×10~6/ml,精子前向运动百分率32%。2实验方法2.1 RT-PCRRT-PCR分别检测SLC22A14mRNA、SPAG6mRNA在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的表达。2.2 Western BlotWestern Blot分别检测SLC22A14蛋白、SPAG6蛋白在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的表达。3统计学分析采用SPSS 21.0版本进行数据分析,以?x±s表示实验结果中计量的资料数据,采用两独立样本t检验比较两组标本之间SLC22A14、SPAG6mRNA和蛋白表达差异,以Pearson相关系数(r)来表示SLC22A14、SPAG6与精子前向运动能力之间的相关性,以α=0.05为检验水准。结果1正常对照组和特发性弱精子症组中SLC22A14mRNA的表达情况SLC22A14mRNA在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的相对表达量分别是0.77±0.08和0.53±0.10,结果显示特发性弱精子症组SLC22A14mRNA表达量低于正常对照组(t=12.834,P0.01)。2正常对照组和特发性弱精子症组中SLC22A14蛋白的表达情况SLC22A14蛋白在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的相对表达量分别为0.80±0.09和0.55±0.10,结果显示特发性弱精子症组精子中SLC22A14蛋白表达量低于正常对照组(t=12.884,P0.01)。3正常对照组和特发性弱精子症组中SPAG6mRNA的表达情况SPAG6mRNA在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的相对表达量分别为0.77±0.06和0.52±0.10,结果显示特发性弱精子症组精子中SPAG6mRNA的相对表达量低于正常对照组(t=13.755,P0.01)。4正常对照组和特发性弱精子症组中SPAG6蛋白的表达情况SPAG6蛋白在正常对照组和特发性弱精子症组精子中的相对表达量分别为0.78±0.09和0.56±0.09,结果显示特发性弱精子症组精子中SPAG6蛋白的相对表达量低于正常对照组(t=12.257,P0.01)5 SLC22A14、SPAG6在精子中表达水平与精子前向运动的相关性分析SLC22A14 mRNA和蛋白表达水平与精子前向运动能力具有正相关性(r=0.761,P0.05;r=0.748,P0.05),SPAG6 mRNA和蛋白表达水平与精子前向运动能力也具有正相关性(r=0.806,P0.05;r=0.766,P0.05)。结论SLC22A14、SPAG6与男性精子的运动能力相关,可能参与了男性特发性弱精子症的发生。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R698.2
【图文】：

男性精子中SLC22A14mRNA的检测

SLC22A14、SPAG6与特发性弱精子症关系的研究

男性精子中SLC22A14蛋白的WesternBlot检测

SLC22A14、SPAG6与特发性弱精子症关系的研究

男性精子中SPAG6mRNA的检测

【参考文献】