慢性肾衰微环境对移植胚胎后肾发育作用的研究

发布时间：2020-08-19 15:10

【摘要】：慢性肾衰竭(chronic renal disease,CRF)是指慢性肾脏疾病引起的肾小球滤过率(glomerular filtrate rate,GFR)下降及与此相关的代谢紊乱和临床症状组成的综合征,发展至末期,各种肾功能完全丧失,称终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)。该病在人类主要死亡原因中排前十位,严重威胁着人们的生存健康,是重要公共卫生问题之一。近30年来慢性肾病发病率有上升趋势,美国慢性肾脏疾病的患病率高达10.9%,慢性肾衰竭患病率为7.6%,而我国慢性肾脏疾病的患病率亦高达8%-10%。慢性肾衰竭的病因较为复杂,主要有糖尿病肾病、高血压肾小球动脉硬化、原发性和继发性肾小球肾炎、肾小管间质病变(慢性肾盂肾炎、慢性尿酸性肾病、梗阻性肾病、药物性肾病等)、肾血管病变、遗传性肾病(如多囊肾、遗传性肾炎)等。其中药物性肾病常由肾毒性药物引起,阿霉素是较为常见的肾毒性药物,可引起严重的肾脏疾病,甚至ESRD。对于ESRD,目前临床上的主要治疗手段包括透析和肾脏移植,但随着目前患病人数的日益增加,两者的弊端也愈发明显。透析仅可部分代替肾脏功能,并且会引发低血压、心力衰竭、心律失常等一系列并发症,此外透析费用较高,会给患者家庭带来严重的经济负担。虽然说目前为止肾脏移植是CRF最好的治疗方式,但由于肾源严重不足,且术后需长期服用免疫抑制药物,特别是ESRD患者人数逐年增多和供体肾源严重缺乏之间的矛盾,急需寻求另一种有效的肾脏替代疗法。近年来研究人员在肾脏再生领域取得了不菲的成绩,有望通过肾脏再生组织工程技术找到有效替代肾脏功能的方法。目前肾脏再生研究主要分为肾脏脱细胞支架、iPS细胞诱导分化、囊胚互补以及后肾移植几个方向,其中后肾移植可通过将后肾移植至宿主体内适宜环境继续发育成具有部分或完整肾脏功能的结构以有效改善宿主受损的肾脏功能,是一种颇具前景的肾脏再生替代疗法。近年来对于后肾移植方面的研究大多以正常肾环境或进行单侧肾切除后的代偿肾环境为基础进行展开,没有在病变肾脏环境下进行后肾移植方面的研究,并且随着研究的深入发现要想得到发育较好的后肾必须进行后肾排尿系统干预,但具体的干预时间其实并不明确。本文拟通过慢性肾衰微环境下移植后肾来探究病变肾脏环境下移植后肾的发育情况并评估给予排尿系统干预的确切时间。研究目的:探究慢性肾衰微环境下移植后肾的发育情况并评估给予排尿系统干预的确切时间。研究方法:选择250g左右雄性Wistar大鼠30只,随机分为实验组(n=25)和对照组(n=5),在适应性培养一周后进行麻醉,实验组大鼠单次尾静脉注射阿霉素(7.5g/kg),对照组大鼠为静脉注射等量生理盐水,在标准实验动物饲养环境(室温20±2℃,相对湿度55%±10%,昼夜明暗交替时间12h)下进行饲养,给予充分饮食饮水。四周后,实验组大鼠进一步分为阿霉素药物组(n=5),后肾移植lw组(n=5),后肾移植2w组(n=5),后肾移植3w组(n=5)以及后肾移植4w组(n=5)。将制备的后肾移植至相应实验组大鼠肾被膜下,每周所有分组大鼠均采集24h尿液和血液样本检测血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)以及24小时尿蛋白。另外收集各组后肾样本进行形态观察、HE染色。研究结果:移植后肾可发育出较为成熟的肾单位结构,移植2w后肾发育长度可达7-9mm,2w前后肾肉眼观察大体颜色正常接近正常肾脏颜色,3w之后发育的后肾出现白色斑块,4w后后肾颜色完全变白。HE染色显示2w时移植的后肾发育出成熟的肾小球和肾小管结构,但3w时出现肾小管扩张,肾小球萎缩,部分肾间质纤维化。4w时后肾情况进一步恶化,肾小球和肾小管萎缩,间质纤维化严重。血生化检测发现SCr(对照组4.38±0.4mg/dl,阿霉素药物组5.42±0.47mg/dl,后肾移植组 4.81±0.05mg/dl)和 BUN(对照组 17.60mg/dl,阿霉素药物组 25.20mg/dl,后肾移植组22.90mg/dl)未见显著性差异。24h尿蛋白(对照组25.62mg,阿霉素药物组183.89mg,后肾移植组57.35mg)可见显著性差异。免疫组化结果发现移植后2w时后肾组织中肾小球marker NPSH2和Pax2表达量最高,而在移植后3w及3w之后NPSH2和Pax2的表达量降低。结论:移植后肾可在慢性肾衰微环境下发育出成熟肾小球肾小管结构,其排尿系统干预时间为移植后2w。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R699.2
【图文】：

后肾,尿囊,红色,颜色