泌尿系草酸钙结石和草酸钙混合碳酸磷灰石结石相关尿液蛋白差异性研究

发布时间：2020-08-28 17:06

　　第一部分:丙酮法与冻干法提取泌尿系结石尿液蛋白差异性分析目的:探讨丙酮沉淀法与冻干法提取泌尿系结石患者尿液蛋白的凝胶条带差异;方法:(1)收集泌尿系结石男性患者和女性患者各2例晨起第一次尿液50ml,去除细胞碎片后分装,-80℃冻存;(2)使用冻干法和丙酮沉淀法富集尿液蛋白;(3)Bradford法测量尿蛋白浓度;(4)SDS-PAGE比较各组间蛋白;(5)Lane 1D凝胶成像分析软件分析二者蛋白凝胶光密度值,SPSS17.0进行数据分析。结果:1、丙酮沉淀法提取泌尿系结石患者尿液蛋白浓度(0.92±0.13mg/ml)高于冻干法提取浓度(2.28±0.55mg/ml),二者差异有统计学意义(P0.05);2、丙酮沉淀法提取泌尿系结石患者尿液蛋白凝胶约有4~7个蛋白条带主要集中在55~95KD、20~34 KD;冻干法提取蛋白凝胶约有3~5个蛋白条带,主要集中在72KD附近和26KD附近。3、丙酮沉淀法提取泌尿系结石患者尿液蛋白凝胶平均光密度值(4.52×107±1.31×107),冻干法提取蛋白凝胶平均光密度值(3.03×107±0.79×107),二者差异无统计学意义。结论:1、冻干法所提取尿液蛋白浓度高于丙酮沉淀法,且二者差异有统计学意义(P0.05);2、丙酮沉淀法提取尿液蛋白种类数目高于冻干法,但二者IOD值差异无统计学意义。第二部分:泌尿系草酸钙结石和草酸钙混合碳酸磷灰石结石尿液蛋白差异分析目的:探讨泌尿系统草酸钙结石、草酸钙混合碳酸磷灰石结石患者尿液蛋白与健康人群尿液蛋白的差异性;方法:(1)收集健康成年男性和女性各2例,草酸钙结石男性患者和女性患者各6例,草酸钙混合碳酸磷灰石结石男性患者和女性患者各6例,晨起空腹第一次尿液50ml,去除细胞碎片后分装冻存;(2)使用丙酮沉淀法提取各组实验样本尿液蛋白;(3)使用SDS-PAGE比较各组间蛋白凝胶条带差异;(4)数据分析。结果:1、男性各组蛋白浓度:Ca Ox组蛋白浓度1.91±0.46ug/ul,Ca Ox+CH组蛋白浓度2.04±0.87ug/ul,正常对照组蛋白浓度1.25±0.11ug/ul;各组间蛋白浓度差异无统计学意义(P0.05)。2、女性各组蛋白浓度:Ca Ox组蛋白浓度1.61±0.65ug/ul,Ca Ox+CH组蛋白浓度1.72±0.81ug/ul,正常对照组蛋白浓度1.07±0.45ug/ul;各组间蛋白浓度差异无统计学意义(P0.05)。3、泌尿系草酸钙结石和草酸钙混合碳酸磷灰石结石患者尿液蛋白凝胶有4~7个条带,分子量主要集中在55~95KD和20~34KD附近,健康人群尿液蛋白凝胶有1~3个条带,主要集中在72KD附近。结论:1、丙酮沉淀法提取草酸钙结石、草酸钙混合碳酸磷灰石及健康人群尿液蛋白浓度无明显差异;2、泌尿系草酸钙结石和草酸钙混合碳酸磷灰石结石患者尿液蛋白种类高于健康人群,分子量主要集中在55~95KD和20~34KD附近。第三部分:泌尿系草酸钙结石和草酸钙混合碳酸磷灰石结石相关尿液蛋白的定量分析目的:定量对比分析健康人群和草酸钙结石、草酸钙混合碳酸磷灰石结石患者尿液中OPN、THP、NGAL、Albumin和α-1-microglobulin的含量;方法:(1)收集健康成年男性和女性各10例,草酸钙结石男性患者(n=16)和女性患者(n=13),草酸钙混合碳酸磷灰石结石男性患者(n=13)和女性患者(n=16),晨起空腹第一次尿液50ml,去除细胞碎片后分装,-80℃冻存;(2)Luminex液相芯片检测系统分析各组样本内各蛋白浓度。(3)数据分析。结果:1、THP:(1)男性组各组间数据对比差异均无统计学意义(P0.05);(2)女性组:正常组(8.46±1.64ug/ml)对比Ca Ox组(1.91±0.43ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH组(1.98±0.37ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);2、NGAL:(1)男性组:正常组(63.32±12.23ng/ml)对比Ca Ox组(427.79±90.17ng/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH(196.93±38.50ng/ml)组差异有统计学意义(P0.05);(2)女性组:正常组(30.32±3.92ng/ml)对比Ca Ox组(503.82±174.35ng/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH(552.85±156.78ng/ml)组差异有统计学意义(P0.05);3、AMBP:男女各组间数据对比差异均无统计学意义(P0.05);4、Albumin:(1)男性组:正常组(48.17±6.21ug/ml)对比Ca Ox组(309.38±33.44ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH组(194.20±33.85ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);(2)女性组:正常组(33.55±3.51ug/ml)对比Ca Ox组(80.69±8.78ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH组(91.72±9.60ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);5、OPN:(1)男性组:正常组(4.65±0.99ug/ml)对比Ca Ox组(1.15±0.40ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH组(0.90±0.12ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);(2)女性组:正常组(1.82±0.28ug/ml)对比Ca Ox组(0.28±0.09 ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);正常组对比Ca Ox+CH组(0.15±0.09ug/ml)差异有统计学意义(P0.05);结论:相对于健康人群,泌尿系草酸钙和草酸钙混合碳酸磷灰石患者尿液中的THP浓度较低(男性组差异无统计学意义)、NAGL浓度较高、Albumin浓度较高、OPN浓度较低、AMBP浓度无差异。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R691.4

【参考文献】