Vasorin在“IGT肾

发布时间：2020-09-01 21:08

　　目的:糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病(diatetes mellitus,DM)最常见的微血管并发症之一,已经成为终末期肾脏疾病首要疾病基础。微量白蛋白尿(microalbuminuria,MAU)被认为是DKD诊断的主要依据。但长期研究表明,MAU作为早期DKD的诊断指标,灵敏度差,特异性不高。研究发现,在DM前期的患者中,约13.1%的患者已出现MAU,即一部分DKD患者的肾损害可能在糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)期就已经发生。我们前期动物实验已证实,在IGT期肾脏已出现结构和功能的改变,因此,相对于DKD我们将这一阶段出现的肾损害称为“IGT肾病”~([1])。尽管在动物实验中观察到在糖尿病前期已出现肾脏损害,但“IGT肾病”仍需在临床上进一步验证,其诊断依据以及发病机制还有待进一步探讨。研究发现多种早期诊断DKD的生物标志物,如:肝型脂肪酸结合蛋白(liver-fatty acid binding protein,L-FABP)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,Kim-1)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、胱抑素(Cysatin C,CysC)等,但这些标志物在“IGT肾病”是否有改变,也需在临床上进一步验证。通过蛋白组学-iTRAQ技术,筛选出差异候选蛋白Vasorin(VASN)。VASN是近年来新发现的一种蛋白,在肾脏中表达,VASN参与体内血管修复、肿瘤发生发展等过程。但VASN蛋白能否作为早期“IGT肾病”的生物标志物以及是否参与“IGT肾病”的发病机制也有待进一步研究证实。本研究从284名体检对象中随机抽取89名研究对象,分为健康对照组(NC)、IGT组、“IGT肾病”组(IGT nephropathy,IGTN)、2型糖尿病组(DM)、2型糖尿病肾病组(DKD),观察不同人群肾损伤标志物、VASN等指标的变化,在临床上进一步验证IGT患者是否存在肾损伤以及VASN在“IGT肾病”中的诊断价值,并初步探讨VASN在“IGT肾病”发病机制中可能发挥的作用。方法:1.收集实验各组人群的一般资料及标本。检测血糖、血脂、肝肾功、胰岛素、24h尿微量白蛋白(urinarymicroalbumin,UMA)、视黄醇结合蛋白(retinol binding protein,RBP)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-beta-D-glucosaminidase,NAG)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、转铁蛋白(Transferrin,TF)、L-FABP、Kim-1、CysC和VASN。检验VASN在“IGT肾病”中的变化及诊断价值。2.取课题组前期实验高脂饲料喂养Zucker Diabetic Fatty(fa/fa,ZDF)大鼠至IGT、DM阶段以及同龄健康Zucker Lean(fa/+,ZL)模型鼠的肾脏组织,检测VASN在肾脏的定位表达以及VASN的表达水平。3.以人肾小管上皮细胞为研究对象,分为正常对照组、缺氧组,检测VASN、硫氧还蛋白2(thioredoin 2,TRX2)、活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)水平以及对肾小管上皮细胞对白蛋白的重吸收的能力。4.分别用小干扰RNA(siRNA)、EX-I1533-M03质粒降低和过表达VASN,缺氧处理后,检测肾小管上皮细胞VASN、TRX2、ROS水平以及其重吸收功能的改变。结果:1.IGTN组肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)较NC组升高(P0.05);肾脏大小:IGTN组较NC、IGT组肾长径增加(P0.05)。2.肾损伤指标:与NC组相比,IGTN组UMA、TF、CysC、GAL、NAG、NGAL、KIM-1、L-FABP均升高(P0.05)。3.尿VASN:与NC组相比,IGTN组下降约27%(P0.05)。4.在IGTN组,尿VASN与CysC、GAL、NAG、NGAL呈负相关,ROC曲线:对“IGT肾病”诊断的灵敏度为78.6%,特异度为64.7%(P0.05)。5.免疫组化观察VASN在大鼠肾脏的表达情况:VASN主要分布于肾小管区。与正常对照组ZL大鼠相比,在ZDF大鼠IGT期、DM期VASN表达下降(P0.05)。6.在缺氧状态下,与NC组相比,缺氧组VASN、TRX2表达水平下降,ROS生成增多近59%,白蛋白摄取下降约50%(P0.05)。siRNA VASN组TRX2表达下降,ROS生成增多,升高近1.4倍,白蛋白摄取减少约70%;VASN过表达组TRX2的表达水平随之升高,ROS生成减少约56%,白蛋白摄取功能较缺氧组恢复近90%(P0.05)。结论:1.在临床上进一步验证了IGT期部分患者存在肾脏损伤,表现为不同程度的肾小管及肾小球功能的损伤,肾小管损伤可能是此阶段更主要的病理生理变化。2.通过iTRAQ技术筛选出的差异蛋白VASN有望成为“IGT肾病”早期诊断新的标志物。3.VASN主要表达在肾小管间质区,在IGT、DM期大鼠肾脏表达下降。4.缺氧条件下,肾小管上皮细胞VASN的表达受到抑制,水平降低的VASN通过下调TRX2的表达,使细胞内ROS产生增加,加剧了肾小管上皮细胞的氧化应激损伤,导致其重吸收功能受损。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：

肾小球,肾小管损伤,标志物,统计学意义

图 1.1 肾小球损伤1.2.3 肾小管损伤标志物比较NGAL：各组较 NC 组均有升高趋势，在组升高（P＜0.05），其余各组间相比，无统组较其他四组升高，有统计学意义（P＜（P>0.05）；RBP：与 N、IGT、DM 组相比NC、IGT、DM 升高，但无统计学差异（PIGTN 组升高（P＜0.05），DKD 组进一步升＜0.05），较 DM 组也升高，并有统计学差异DKD 组较 N、IGT 组升高（P＜0.05），其中组进一步升高，且有统计学差异（P＜0.05）；DM、DKD 组均升高（P＜0.05），其中 DKDCysC：IGTN 组升高最明显，较 NC、DM 组组较 DM 组升高（P＜0.05），DKD 组较（P>0.05）；L-FABP:在各组中逐渐升高，较

肾小管损伤,指标比较

13图 1.2 肾小管损伤指标比较1.2.4 VASN 比较1.2.4.1 尿 VASN与 NC 组相比，IGT、IGTN、DM、DKD 组四组均呈下降趋势，其中 IGTN组较 N 组下降（P＜0.05），DKD 组降低最明显，较其他四组 NC、IGT、IGTN、DM 组均降低，有统计学差异（P＜0.05）。（表 1.4，图 1.3）表 1.4 尿 VASN 比较注：a：与 NC 组相比 P<0.05；b：与 IGT 组相比 P<0.05；c：与 IG T N 组相比 P<0.05；d：与 DM 组相比 P<0.05NC IGT IGTN DM DKD P 值VASN(ng/ml) 16.67±2.31 12.50±1.27 12.20±1.35a13.33±1.58 8.64±3.27abcd0.001

Vasorin在“IGT肾

尿VASN比较

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