CD248抗体干预小鼠肾脏纤维化形成的实验研究
发布时间：2020-09-09 18:13
背景慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)已成为全球关注的公共健康问题,其发病率和死亡率逐年在增加。纤维化是各种原因CKD进展至ESRD的共同通路,减缓或逆转纤维化过程意义重大。尽管面临巨大的临床需要,但是目前能够有效干预纤维化的策略仍旧不多。CD248是分子量为175 kDa的Ⅰ型跨膜糖蛋白,研究发现CD248分子参与纤维化发生发展过程,但是具体的作用机制仍不清楚。目的本研究拟以小鼠肾纤维化模型为研究对象,输注CD248单克隆抗体,检测纤维化相关指标,分析干扰CD248分子通路对纤维化的影响,进而探讨CD248在纤维化中的作用机制。方法1.建立叶酸肾纤维化小鼠模型:将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和叶酸(Folicacid,FA)组,分别予以腹腔注射NaHC03或者叶酸(剂量250mg/kg)。在注射叶酸后第3、14和28天处死小鼠,收集血液和肾脏组织,检测血肌酐和尿素水平,HE和MASSON染色检测肾脏病理结构,免疫组化检测肾组织a-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白表达水平。2.CD248单克隆抗体干预实验:将小鼠随机分为正常对照组、叶酸模型PBS注射对照组、叶酸模型CD248抗体低剂量注射组和高剂量注射组,在腹腔注射后第3天开始,分别予以尾静脉输注PBS、2.5mg/kg抗体或者7.5mg/kg抗体。在叶酸模型第28天处死小鼠,检测血肌酐和尿素水平,HE和MASSON染色观察肾脏纤维化变化,Western Blot、qRT-PCR和免疫组化染色检测肾组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白和mRNA表达变化。结果1.与正常对照组比较,FA3天、FA14天和FA28天叶酸模型组血肌酐和尿素水平显著升高(P0.05),肾纤维化程度逐渐加重,肾组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白表达均显著升高。2.与叶酸模型PBS注射对照组比较,CD248抗体低剂量组和CD248抗体高剂量组血肌酐水平显著降低(P0.05),但尿素水平降低不明显(P0.05)。HE和MASSON染色结果显示,与正常对照组比较,叶酸模型PBS注射对照组肾组织纤维化严重;与叶酸模型PBS注射对照组比较,CD248抗体低剂量组和CD248抗体高剂量组肾纤维化程度明显减轻,低剂量组减轻程度较高剂量组更为显著。Western Blot、qRT-PCR和免疫组化染色结果显示,与叶酸模型PBS注射对照组比较,CD248抗体低剂量组和CD248抗体高剂量组肾组织α-SMA、Collagen Ⅰ、Fibronectin以及CD248蛋白和mRNA表达水平显著下降(P0.05)。结论1.成功建立叶酸肾纤维化小鼠模型。2.CD248抗体干预能够改善纤维化程度,CD248可能成为纤维化诊疗的重要靶点。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R692
【部分图文】：
１．２结果逡逑１．２．１叶酸肾纤维化小鼠模型建立逡逑如图１－１Ａ，与正常对照组比较，叶酸组血清肌酐水平显著升高（Ｐ＜０．０１），逡逑在整个变化趋势中可见注射叶酸后第３天（ＦＡ３天组）小鼠血清肌酐水平最高，逡逑到了第１４天和第２８天可见小鼠肌酐水平逐渐恢复。如图１－１Ｂ，ＵＲＥＡ结果显示，逡逑与正常对照组比较，ＦＡ３天组、ＦＡ１４天组和ＦＡ２８天组尿素水平均升高，但ＦＡ２８逡逑天组与正常对照组比较无统计学意义（Ｐ＞邋０．０５）。如图１－１Ｃ，邋ＨＥ染色结果显示，逡逑正常对照组肾脏病理结构基本正常，叶酸模型各组小鼠肾脏表现为不同程度的逡逑肾纤维化，主要表现为肾小球萎缩、肾小管扩张和肾间质明显X椏恚渲校疲粒玻稿义咸熳樯鲈嗨鹕撕蜕黾渲氏宋潭茸钗现亍＃停粒樱樱希稳旧允荆胝６哉斟义献楸冉
本文编号：2815302
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R692
【部分图文】：
１．２结果逡逑１．２．１叶酸肾纤维化小鼠模型建立逡逑如图１－１Ａ，与正常对照组比较，叶酸组血清肌酐水平显著升高（Ｐ＜０．０１），逡逑在整个变化趋势中可见注射叶酸后第３天（ＦＡ３天组）小鼠血清肌酐水平最高，逡逑到了第１４天和第２８天可见小鼠肌酐水平逐渐恢复。如图１－１Ｂ，ＵＲＥＡ结果显示，逡逑与正常对照组比较，ＦＡ３天组、ＦＡ１４天组和ＦＡ２８天组尿素水平均升高，但ＦＡ２８逡逑天组与正常对照组比较无统计学意义（Ｐ＞邋０．０５）。如图１－１Ｃ，邋ＨＥ染色结果显示，逡逑正常对照组肾脏病理结构基本正常，叶酸模型各组小鼠肾脏表现为不同程度的逡逑肾纤维化，主要表现为肾小球萎缩、肾小管扩张和肾间质明显X椏恚渲校疲粒玻稿义咸熳樯鲈嗨鹕撕蜕黾渲氏宋潭茸钗现亍＃停粒樱樱希稳旧允荆胝６哉斟义献楸冉
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