帕立骨化醇在糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化的作用研究

发布时间：2017-04-02 01:09

  本文关键词：帕立骨化醇在糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化的作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的流行病学显示,我国糖尿病肾病(DKD)已迅速上升为终末期肾病的重要原因,在透析患者中比例仅次于慢性肾小球肾炎。肾小管在DKD初期便发生改变,伴随着间质纤维化的出现,明显增加肾脏的不良预后。既往研究发现,肾小管-间充质转化(EMT)和肾小管间质纤维化密切相关,且受多种内在机制共同调控,包括Klotho、Wnt/β-catenin及TGF-β信号途径。因此,通过调控以上目标蛋白的表达或信号途径的传导或可成为抑制DKD肾小管上皮EMT及肾间质纤维化的重要途径。本研究利用帕立骨化醇干预DKD大鼠模型,以探讨其对肾小管上皮EMT及小管间质纤维化的作用及可能机制,最终为DKD肾脏纤维化的防治提供新线索。方法利用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病肾病模型。将DKD大鼠按随机数字表法分为:(1)帕立骨化醇干预组(P组):帕立骨化醇溶于丙二醇中,于造模成功后第2d给药,剂量为0.4μg.kg-1,3次/周;(2)糖尿病肾病组(D组):给予等体积的丙二醇腹腔注射。设置正常对照组(C组):干预方法同D组。帕立骨化醇连续干预4周或12周后,取各组大鼠血、尿及肾组织标本。检测一般生化指标;取肾组织进行病理学检查;利用免疫组化及Western印迹技术检测肾组织E-钙粘蛋白(Ecadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、β-catenin、Wnt-4及Klotho蛋白的表达;并进行各观察指标间的相关性分析。结果(1)一般指标:D组大鼠SCr、BUN、24 h尿蛋白及UACR水平均较C组上升,而P组均较D组下降(均P0.05);与C组比较,D组血磷与i PTH水平均上升,血钙下降,但相较于D组,P组血磷与i PTH均回降,血钙回升(均P0.05)。(2)病理学检查:C组大鼠肾小管结构完整清晰,无明显病理改变;D组可见肾小管间质局部炎症细胞浸润,肾小管上皮细胞脱落,小管扩张,基底膜断裂,与C组比较,纤维化面积增大(P0.05),而P组较D组病理改变较轻,纤维化面积较小(P0.05)。(3)各组肾组织E-cadherin、α-SMA及FN蛋白的表达:D组大鼠肾组织Ecadherin蛋白表达低于C组,而P组高于D组(均P0.05);与C组比较,D组大鼠肾组织α-SMA与FN蛋白表达均明显增加,而P组表达均较D组减少(均P0.05)。(4)各组肾组织TGF-β1、Wnt4、β-catenin及Klotho蛋白的表达:与C组比较,D组Klotho蛋白水平降低,而P组较D组水平升高(均P0.05);与C组比较,D组TGF-β1、Wnt-4和β-catenin蛋白表达水平显著上升,而与D组比较,P组以上蛋白的水平均较D组下降(均P0.05)。(5)各观察指标间相关性分析:Klotho蛋白水平和E-cadherin蛋白水平呈正性相关(r=0.924,P0.05),而与纤维化面积、α-SMA、FN、TGF-β1、Wnt-4及β-catenin均呈负相关(r=-0.886,P0.05;r=-0.806,P0.05;r=-0.623,P0.05;r=-0.749,P0.05;r=-0.855,P0.05;r=-0.881,P0.05)。结论(1)帕立骨化醇可抑制DKD肾小管间质纤维化,改善肾功能,同时减轻尿蛋白,对肾脏具有一定的保护作用。(2)帕立骨化醇可阻断DKD肾小管上皮的EMT。(3)帕立骨化醇可促进DKD肾小管Klotho表达,同时抑制肾小管间质TGF-β1、Wnt-4及β-catenin表达。其中,通过增加Klotho的表达,从而抑制Wnt/β-catenin传导途径激活和TGF-β1合成,成为帕立骨化醇阻断DKD肾小管上皮EMT及小管间质纤维化的内在途径之一。结果
【关键词】：帕立骨化醇 糖尿病肾病 肾小管间质纤维化 Wnt/β-catenin信号通路 Klotho
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-14
• 第一章 材料与方法14-23
• 1 材料14-17
• 1.1 实验动物14
• 1.2 实验药物14
• 1.3 主要实验试剂14-15
• 1.4 主要实验试剂的配制15-16
• 1.5 主要实验器材与设备16-17
• 2 方法17-23
• 2.1 动物模型的建立17-18
• 2.2 动物分组与给药18
• 2.3 动物一般情况的观察18
• 2.4 标本收集与处理18
• 2.5 血、尿指标检测18
• 2.6 肾脏病理学检查18-19
• 2.7 免疫组化19-20
• 2.8 Western印迹20-22
• 2.9 统计学处理22-23
• 第二章 结果23-39
• 1 糖尿病肾病模型建立情况23
• 2 一般情况23
• 3 体重、肾重与肾重/体重指数23-25
• 4 空腹血糖25-26
• 5 血清肌酐与血尿素氮26
• 6 尿蛋白26-27
• 7 血钙磷与i PTH27-28
• 8 肾脏病理28-30
• 9 各组肾组织E-cadherin、α-SMA及FN蛋白的表达30-32
• 10 各组肾组织TGF-β1 蛋白的表达32-33
• 11 各组肾组织Wnt4及 β-catenin蛋白的表达33-35
• 12 各组肾组织Klotho蛋白的表达35-37
• 13 各观察指标间的相关性分析37-39
• 第三章 讨论39-43
• 1 帕立骨化醇对糖尿病肾病肾小管上皮间充质转化及TGF-β1 表达的影响39
• 2 帕立骨化醇对糖尿病肾病Wnt/β-catenin信号途径的影响39-41
• 3 帕立骨化醇对糖尿病肾病肾小管上皮Klotho蛋白表达的影响41-43
• 第四章 主要结论与展望43-44
• 参考文献44-50
• 附录A 英文缩写索引50-51
• 附录B 综述51-61
• 参考文献57-61
• 在学研究成果61-63
• 致谢63

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本文编号：281619