miR-660-5p在肾细胞癌中的表达水平和功能研究

发布时间：2020-09-18 08:24

　　 目的:肾癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤之一,预后差,目前其发生、发展的分子机制尚未完全明确。微小RNA(miRNAs)是一类小分子非编码RNA,作为近期的研究热点之一,其已被证实在多种人类恶性肿瘤的生物学进程中发挥重要的调控作用。有报道指出miR-660-5p是高度保守的miRNA,在肺癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、白血病等多种肿瘤中表达异常,并可通过调控细胞增殖、迁移、侵袭力和凋亡的改变而参与肿瘤的发生发展。然而目前miR-660-5p在肾癌中的功能及作用的分子机制尚未明确,亦未有相关研究证实。因此本课题研究通过在肾癌组织中检测miR-660-5p的表达,并通过体外细胞实验探究其功能,进一步探索其作为肾癌生物标记物应用于临床的可能性。方法:通过基因芯片研究结果,筛选出肾癌组织中低表达的miR-660-5p,通过RT-qPCR方法检测其在25对肾癌及癌旁正常组织中的表达。采用四格表行?~2检验探究miR-660-5p表达水平与患者临床特征之间的关系。为探究其功能,在肾癌细胞(786-O和ACHN)转染miR-660-5p功能类似物或抑制剂以过表达或敲低其表达,通过划痕实验验证miR-660-5p对肾癌细胞迁移的影响,MTT和CCK-8实验验证其对肾癌细胞增殖的影响,Transwell实验验证其对肾癌细胞迁移和侵袭的影响,流式细胞术验证其对肾癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示25对肾癌组织及癌旁正常组织中,有18对(72%)表达下调,癌旁正常组织的表达量为肾癌组织的3.44±0.375倍,提示肾癌组织表达量明显低于癌旁正常组织(p0.01)。miR-660-5p的表达水平与患者临床特征之间无明显差异(P0.05),未见明显相关性。与对照组相比,在786-O和ACHN细胞中转染miR-660-5p inhibitor后,其表达水平分别是对照组的0.13±0.029和0.01±0.00309倍。而转染miR-660-5p mimic后,其表达水平分别是对照组的1762.10±261.812和590.19±112.202倍(P0.05)。细胞功能实验结果中,与阴性对照组相比,划痕实验结果表明过表达miR-660-5p可抑制肾癌细胞迁移,敲低表达则促进细胞迁移;MTT和CCK-8实验结果表明过表达miR-660-5p可抑制肾癌细胞增殖,敲低则促进细胞增殖;Transwell实验表明过表达可抑制肾癌细胞迁移和侵袭,敲低则促进细胞迁移和侵袭;流式细胞术实验表明过表达可诱导肾癌细胞凋亡,敲低则抑制细胞凋亡。结论:miR-660-5p在肾癌组织中显著低表达,上调miR-660-5p可抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力,并诱导细胞凋亡,而下调miR-660-5p则促进肾癌细胞迁移、侵袭和增殖,并抑制细胞凋亡。以上结果表明,miR-660-5p在肾癌组织中异常表达,发挥着抑癌基因的作用,并参与调控肾癌细胞的生物学功能,有望成为肾癌早期诊断和治疗的新生肿瘤标志物。
【学位单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.11
【部分图文】：

图 1：生物信息软件预测 miR-660-5p 的靶基因（GALNT7）以及互补位点（图中下划线部分）综上所述，本课题实验从分子及基因学水平阐述肾癌的发生发展机制，并寻找肾癌早期诊断及术后监测的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点，对肾癌的诊断和治

图2.miR-660-5p在25对肾癌组织及癌旁正常组织的表达水平。图2A. 肾癌组织中miR-660-5p 与配对的癌旁正常组织表达量比值经对数转换后结果；图 2B. 肾癌组织与癌旁正常组织中的相对表达量，肾癌组织表达量明显低于癌旁正常组织（P<0.01）图 2C.miR-660-5p在转染至 ACHN 和 786-O 肾癌细胞的表达水平（P<0.05）。(miR, 微小 RNA; NAT, 癌旁正

癌旁正常组织的表达量为肾癌组织的 3.44 0.375 倍，提示肾癌组织表达量明显低于癌旁正常组织（P<0.01）。图2.miR-660-5p在25对肾癌组织及癌旁正常组织的表达水平。图2A. 肾癌组织中miR-660-5p 与配对的癌旁正常组织表达量比值经对数转换后结果；图 2B. 肾癌组织与癌旁正常组织中的相对表达量，肾癌组织表达量明显低于癌旁正常组织（P<0.01）图 2C.miR-660-5p在转染至 ACHN 和 786-O 肾癌细胞的表达水平（P<0.05）。(miR, 微小 RNA; NAT, 癌旁正常组织; NC, 阴性对照; RCC, 肾细胞癌。)Figure 2. Expression of miR-660-5p in 25 paired RCC tissues and NATs. (A) Log2 ratios(RCC/NAT) of miR-660-5p expression in 25 paired tissues. (B) The relative expression of miR-660-5p in RCC and NATs. (C) The expression of miR-660-5p inACHN and 786-O cells followingtransfection. *P<0.05; **P<0.01. miR, microRNA; NAT, normal adjacent tissue; NC, negativecontrol; RCC, renal cell carcinoma.2 miR-660-5p 表达水平与患者临床病理特征 间无明显相关性将病例按 miR-660-5p 相对表达量平均数-1.7862 分为界分高表达组和低表达组，其中高表达组 12 例，低表达组 13 例。按照患者年龄（年龄以中位数 52 岁分界）、性别、病理组织学分型、临床分期分组，通过建立四格表进行 2检验，探究 miR-660-5p 表达水平与患者临床特征之间的关系，结果如表 5 所示，未发现 miR-660-5p 表达水平与病例相关临床特征之间的关系（p>0.05）

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本文编号：2821408