和厚朴酚通过HOXA9抑制膀胱肿瘤细胞增殖的实验研究
发布时间：2020-09-27 13:26
目的探讨和厚朴酚抑制膀胱尿路上皮癌细胞增殖中的作用及同源盒基因HOXA9在其中的意义。方法培养膀胱尿路上皮癌T24细胞株,在不同浓度和厚朴酚处理条件下,运用流式细胞技术分析凋亡及细胞周期的变化,利用CCK8、集落形成、划痕实验等方法测定细胞增殖能力的变化,利用蛋白质印迹技术测定HOXA9、增殖细胞核抗原(PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen),及凋亡相关蛋白Bad、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)、Cleaved-caspase3的表达水平。收集人体正常膀胱组织、非肌层浸润性低级别膀胱尿路上皮癌和高级别膀胱癌的临床标本,通过免疫组织化学染色法检测HOXA9表达情况。结果和厚朴酚可以剂量和时间依赖方式,抑制T24细胞的增殖,并诱导其凋亡。随药物浓度的增加(25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L)和时间的推移(24h、48h),对T24细胞抑制生长增殖及诱导凋亡的作用亦呈增强趋势,凋亡相关蛋白Bad及蛋白Cleaved-caspase3的表达水平升高,而Bcl-2、PCNA的表达水平降低。同时,和厚朴酚可以增强T24细胞中HOXA9表达水平,降低NF-kB信号通路中磷酸化的P65的表达水平。进一步的实验显示:沉默HOXA9明显减弱了和厚朴酚对T24细胞增殖的抑制作用,并能逆转磷酸化P65表达水平的下降。结论和厚朴酚可抑制膀胱尿路上皮癌细胞生长、增殖,可能与HOXA9表达增高及磷酸化的P65表达下降有关。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：
15图 1 不同浓度的和厚朴酚处理 T24 细胞后，分别于 24、4观测的集落形成（“**”P<0.01 与对照组相比）Figure 1: Colony formation of T24 cells at 24, 48, and 72 hHNK of different concentrations ("**" P < 0.01 compared with the3.2 细胞活力测定用不同浓度的和厚朴酚（0、25、30、35μmol/ L）处理 T72 小时后，可见 T24 细胞活力变化呈现明显剂量和时间依赖性高，作用时间越久，活力降低越显著。详见表 1、图 2。
不同浓度和厚朴酚处理 T24 细胞，在不同时间点（24,48,72）比（“*”P<0.05,“**”P<0.01 与对照组相比；“#”P<0.05,“l/L 组相比;“▲”P<0.05 与 30umol/L 组相比）e 2: Proliferation of T24 cells at 24, 48, and 72 hours after treatedoncentrations of HNK(“*”P<0.05,"**" P < 0.01 compared with P < 0.05, "##" P < 0.01 compared with the 25umol / L group; "▲ with the 30umol / L group)朴酚处理 T24 细胞后的形态变化同浓度的和厚朴酚（0、25、30、35μmol/ L）处理细胞 24、4镜上观察其形态变化，其中对照组（0μmol/L）细胞生长状视野分布，细胞间排列紧密，折光好；随着浓度的升高，其折光弱，细胞之间排列疏松，可见皱缩、脱璧等现象，随着时
图 3 T24 经不同浓度和厚朴酚处理后细胞形态变化（10x）Figure 3 Cellular morphology of T24 observed at different time points after treatedby HNK of different concentrations of HNK (10x)3.4 和厚朴酚对 T24 细胞周期阻滞和增殖抑制效应不同浓度的和厚朴酚（0,25,30,35μmol/ L）处理细胞 48 小时后，流式细胞分析结果显示：和厚朴酚显著的诱导 T24 细胞生长停滞在 G1 期，随着浓度的增加，其 G1 期阻滞更为明显，可见和厚朴酚能够阻滞 T24 细胞的 DNA 合成，如图 4 所示。肿瘤细胞具有旺盛的增殖活性，PCNA 可作为评价细胞增殖状态的指标，通过Western blot 分析 PCNA 的半定量表达水平如图示：在和厚朴酚处理的 24h 和 48h组，PCNA 蛋白表达随着和厚朴酚浓度逐渐增加而降低。和厚朴酚能够抑制 T24细胞的增殖。表 2 流式分析不同浓度和厚朴酚处理 T24 细胞 48h 的周期变化
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：
15图 1 不同浓度的和厚朴酚处理 T24 细胞后，分别于 24、4观测的集落形成（“**”P<0.01 与对照组相比）Figure 1: Colony formation of T24 cells at 24, 48, and 72 hHNK of different concentrations ("**" P < 0.01 compared with the3.2 细胞活力测定用不同浓度的和厚朴酚（0、25、30、35μmol/ L）处理 T72 小时后，可见 T24 细胞活力变化呈现明显剂量和时间依赖性高，作用时间越久，活力降低越显著。详见表 1、图 2。
不同浓度和厚朴酚处理 T24 细胞，在不同时间点（24,48,72）比（“*”P<0.05,“**”P<0.01 与对照组相比；“#”P<0.05,“l/L 组相比;“▲”P<0.05 与 30umol/L 组相比）e 2: Proliferation of T24 cells at 24, 48, and 72 hours after treatedoncentrations of HNK(“*”P<0.05,"**" P < 0.01 compared with P < 0.05, "##" P < 0.01 compared with the 25umol / L group; "▲ with the 30umol / L group)朴酚处理 T24 细胞后的形态变化同浓度的和厚朴酚（0、25、30、35μmol/ L）处理细胞 24、4镜上观察其形态变化，其中对照组（0μmol/L）细胞生长状视野分布，细胞间排列紧密，折光好；随着浓度的升高，其折光弱，细胞之间排列疏松，可见皱缩、脱璧等现象，随着时
图 3 T24 经不同浓度和厚朴酚处理后细胞形态变化（10x）Figure 3 Cellular morphology of T24 observed at different time points after treatedby HNK of different concentrations of HNK (10x)3.4 和厚朴酚对 T24 细胞周期阻滞和增殖抑制效应不同浓度的和厚朴酚（0,25,30,35μmol/ L）处理细胞 48 小时后，流式细胞分析结果显示：和厚朴酚显著的诱导 T24 细胞生长停滞在 G1 期，随着浓度的增加，其 G1 期阻滞更为明显，可见和厚朴酚能够阻滞 T24 细胞的 DNA 合成，如图 4 所示。肿瘤细胞具有旺盛的增殖活性，PCNA 可作为评价细胞增殖状态的指标，通过Western blot 分析 PCNA 的半定量表达水平如图示：在和厚朴酚处理的 24h 和 48h组，PCNA 蛋白表达随着和厚朴酚浓度逐渐增加而降低。和厚朴酚能够抑制 T24细胞的增殖。表 2 流式分析不同浓度和厚朴酚处理 T24 细胞 48h 的周期变化
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本文编号：2827938
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