HMGB1对前列腺间质细胞的促增殖作用及其可能机制

发布时间：2020-10-12 02:27

　　 目的:1.探讨HMGB1通过促前列腺间质细胞增殖、迁移作用在良性前列腺增生(BPH)发生过程中起重要作用。2.探讨HMGB1通过影响ERK、STAT信号通路的受体作用途径发挥促前列腺间质细胞增殖的作用。方法:1.购买人前列腺间质细胞并进行细胞培养、传代、冻存,实验分组:control组、HMGB1(50ng/m1)组、HMGB1(100ng/ml)组、HMGB1(200ng/ml)组;CCK8法检测细胞活力;EdU实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。2.实验分组:control组、5min组、10min组、30min组、60min组,用200ng/ml HMGB1刺激前列腺间质细胞不同时间点后收集细胞,Western-Blot法检测并比较不同时间点p-ERK 1/2、p-STAT3蛋白的表达;实验分组:control组、2h组、4h组、8h组、12h组、24h组,用200ng/ml HMGB1刺激前列腺间质细胞不同时间点后收集细胞,Western-Blot法和免疫组化法检测并比较不同时间点RAGE、TLR4蛋白的表达;实验分组:control组、HMGB1组、HMGB1+FPS-ZM1(RAGE阻断剂10ug/ml)组、HMGB1+TAK-242(TLR4阻断剂1ug/ml)组、FPS-ZM1(10ug/ml)组、TAK-242(1ug/ml)组,用200ng/m1 HMGB1、RAGE阻断剂和TLR4阻断剂刺激前列腺间质细胞5min后收集细胞,Western-Blot法检测并比较各组p-ERK 1/2、p-STAT3蛋白的表达,EdU实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果:1.给予间质细胞不同浓度HMGB1后,与control组和25ng/ml组比较,50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml/、800ng/ml组细胞的增殖活力明显增加(P0.05),且200ng/ml、400ng/ml/、800ng/ml组之间无明显差异(P0.05);与control组比较,50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml组细胞EdU的阳性率明显增加(P0.05),其中100ng/ml、200ng/ml组统计学意义更明显(P0.01);与control组比较,100ng/ml、200ng/ml组细胞的细胞周期S期细胞比例明显增加(P0.05),其中200ng/ml组更明显(P0.01),与EdU实验结果接近;与control组比较,100ng/ml、200ng/ml组细胞的迁移能力也是增加的(P0.05)。2.给予间质细胞200ng/mlHMGB1 5min、10min、30min、60min干预后,与control组比较,5min、10min组p-ERK 1/2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P0.05),其中5min组表达较明显,且p-STAT3蛋白表达更明显(P0.01);给予间质细胞200ng/ml HMGB1 2h、4h、8h、12h、24h干预后,与control组比较,4h、8h、12h组RAGE、TLR4蛋白表达明显增加(P0.05),其中8h组RAGE、TLR4蛋白较其他组表达最明显,且在胞浆胞膜均有表达,其余无明显统计学差异;在给予间质细胞HMGB1的基础上,联合给予RAGE阻断剂后,p-ERK 1/2蛋白表达较单纯HMGB1组下降(P0.01),p-STAT3蛋白表达较单纯HMGB1组无明显差异(P0.05),EdU的阳性率较单纯HMGB1组也减少(P0.05);在给予间质细胞HMGB1的基础上,联合给予TLR4阻断剂后,p-STAT3蛋白表达较单纯HMGB1组下降(P0.05),p-ERK 1/2蛋白表达较单纯HMGB1组无明显差异(P0.05),EdU的阳性率较单纯HMGB1组也减少(P0.05);且联合RAGE阻断剂和联合TLR4阻断剂后,较单纯HMGB1组间质细胞的S期细胞比例也均减少(P0.01)。结论:1.HMGB1可能通过RAGE、TLR4受体介导的ERK、STAT信号通路促进前列腺间质细胞的增殖。2.HMGB1可能通过促进前列腺间质细胞的增殖来参与BPH的发生发展过程。
【学位单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R697.3
【部分图文】：

*p<0.05,**p<0.01 vs. control 组.图 1 注：A：各组细胞 EdU 的表达情况； B：各组细胞 EdU 阳性率水平的比较图 1：EdU 实验检测各组细胞的增殖情况（×200）Figure 1 note: A: the EdU expression in each group; B: comparison of EdU positive rates ineach groupFigure 1:the proliferation of cells in each group was detected by EdU experiment(×200)3.流式细胞仪检测不同浓度的 HMGB1 对细胞周期的影响与 control 组比较，G0G1 期细胞基本无明显变化，200ng/ml 组略有降低(P<0.05)；S 期细胞 100、200ng/ml 组明显增加(P<0.05)，其中 200ng/ml 组增加更为明显一些(P<0.01)；G2M期细胞 100、200ng/ml 组减少(P<0.05)，其中 200ng/ml 组减少更为明显一些(P<0.01)。从结

*p<0.05,**p<0.01 vs. control 组.图 2 注：A：各组细胞的周期分布的情况； B：各组细胞的周期分布的比较图 2：流式细胞仪检测各组细胞的周期情况Figure 2 note: A: cell cycle distribution in each group; B: comparison of cell cycledistribution in each groupFigure 2: the cell cycle of each group was detected by flow cytometry4.Transwell 实验检测不同浓度的 HMGB1 对细胞迁移的影响从小室外观来看，与 control 组比较，50ng/ml 组染色结果并无明显差异，说明细胞迁移能力无明显改变；100、200ng/ml 组染色较深，说明迁移的细胞明显增多。从 33%醋酸洗脱下来的结晶紫染色液 OD 值来看，与 control 组比较，50ng/ml 组的 OD 值无明显变化（P>0.05），100、200ng/ml 组的 OD 值明显增加（P<0.05），间接反映迁移的细胞数目明

5vs. control 组. 3 注：A：各组细胞迁移能力染色的情况； B：各组细胞迁移能力水平的比较图 3：Transwell 实验检测各组细胞的迁移情况gure 3 note:A: staining of cell migration ability in each group; B: comparison of cemigration ability in each groupure 3: the migration of cells in each group was detected by Transwell experime
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本文编号：2837495