CENPF对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其临床诊断价值研究

发布时间：2020-10-13 14:30

　　 【研究背景及目的】世界范围内,膀胱癌位列男性最常见实体瘤的第4位,在女性位列第7位。我国大城市中膀胱癌的发病率已位列男性常见恶性肿瘤的第6位,而死亡率位列第7位。在初诊的膀胱癌病人中,70-80%为NMIBC病人,就是我们所说的非肌层浸润性膀胱癌,一般采用经尿道肿瘤电切的微创手术方法治疗,如肿瘤无进展,可达治愈目的。但是,约30%的NMIBC会进展为MIBC,此时即便采用膀胱全切+盆腔淋巴结清扫术,2年内仍有约50%的MIBC病人会出现局部复发,3年生存率小于50%,预后差。但是,目前临床上缺乏预测NMIBC进展风险的分子标志物,更缺乏阻断膀胱癌进展的靶向药物。患者现阶段的诊断和随访主要依据膀胱镜检查,但其操作有创,成本高;因此研究基因改变在膀胱癌中所起的作用,深入探索膀胱癌发生发展的分子机制,研究鉴别不同级别和分期膀胱癌的分子标记物,可以更早期发现膀胱癌患者,判断其进展风险,对于最终延长膀胱癌患者的寿命和提高患者生活质量意义重大。随着基因芯片分析、生物信息学分析等技术的不断发展,大量有一定诊断及判断预后价值的膀胱癌分子标记物在基础研究中得到证实,癌症基因测序已应用于临床研究,将来有希望纳入常规的临床诊治。我们前期运用高通量转录组测序手段,以膀胱癌病人组织标本为研究对象,筛选出大量膀胱癌中差异表达的分子标记物。对测序结果的分析发现,CENPF基因在膀胱癌组织中表达明显高于正常组织,并且在肌层浸润性膀胱癌中的表达较非肌层浸润高,具有表达的稳定性和继续实验的可行性。CENPF(着丝粒蛋白F)主要的功能是调控细胞有丝分裂和细胞周期的正常进行。CENPF被发现在多种肿瘤中表达升高,但在膀胱癌中未有相关研究。【研究方法】1、通过RT-PCR和免疫组化实验,进一步扩大样本量对CENPF在膀胱癌患者组织中的表达情况进行了验证,并对不同分期和分期的膀胱癌患者组织中的表达进行了比较;2、收集膀胱癌患者的尿液以及对照组患者的尿液,通过ELISA的方法对尿中CENPF的表达进行检测,并通过对比分析其临床诊断价值。3、选择高表达的膀胱癌细胞系,通过转染SiRNA使CENPF表达降低后,验证CENPF对膀胱癌细胞在细胞生物学行为上的作用,包括细胞的增殖实验、观察迁移和侵袭能力变动的transwell小室实验,还通过流式细胞系查看细胞周期的变化,和细胞凋亡的增减进行了检测。【结果】1、30例不同类型膀胱癌患者的组织样本的PCR实验结果显示,膀胱癌组织中的CENPF表达升高,和正常组织中CENPF的表达差异显著,并且肌层浸润性膀胱癌组织中的表达高于非肌层浸润膀胱癌患者的组织,在另外30例样本的免疫组化实验中发现了类似的结果,与测序结果一致。2、膀胱癌患者尿液中CENPF的表达高于正常对照组,并且与肿瘤分级分期相关,差异有统计学意义。3、CENPF被干扰后,膀胱癌细胞T24的细胞增殖速度减缓,迁移侵袭能力减低、细胞周期进程受阻,细胞凋亡增多,证实了CENPF能影响肿瘤细胞的功能。【结论】CENPF在膀胱癌组织中高表达,并于肿瘤恶性程度相关,CENPF在膀胱癌患者尿液中表达升高,在不同分级和分期的膀胱癌患者尿液中表达差异有统计学意义。CENPF能影响膀胱癌细胞的肿瘤生物学功能。CENPF有望成为膀胱癌诊断、鉴别肌层浸润性膀胱癌和非肌层浸润性膀胱癌的标志以及治疗的靶点。
【学位单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：

图 1、全基因组测序样本中 CENPF 差异表达值图注：(T 代表肿瘤，N 代表正常组织，每对组织的 N 都在相应 T 的右侧；525、611、613、686、831073 为肌层浸润性膀胱癌组织标本，538、554、567、596、663为非肌层浸润性膀胱癌标本，可以看出 10 对样本中有九对，肿瘤中 CENPF 的表达高于正常，而其中左侧的五对肌层浸润的膀胱癌组织中 CENPF 的表达高于右侧非肌层浸润膀胱癌组织)。（二）扩大样本 PCR 实验结果1.CENPF 的表达趋势与基因测序结果一致。通过实时定量 PCR 检测 30 对膀胱癌组织标本CENPF 的表达量：30对中有24对肿瘤中的CENPF 表达高于癌旁正常组织，另外 6 对肿瘤中 CENPF 的表达低于正常，高表达组（24 对）和低表达组（6 对）进行比较，两组性别无差异（卡方检验，P=0.51），两组年龄均值分别为 64.8 和 64.25岁，差值无统计学意义(t 检验，P=0.89)，两组在分期上无差异（卡方检验，P=1.00）。

军医大学硕士学位论文P<0.05）（详见图 2、图 3）。说明了 CENPF 在膀胱癌中为高表达，此结果期测序的结果一致， 而在不同分期的膀胱癌中的比较，即非肌层浸润和肌胱癌中 CENPF 表达量的比较中，我们得到的结果也与测序一致，充分说明序技术是高效可靠的，也为我们后续继续进行实验提供了很好的数据支持。

CENPF 对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其临床诊断价值研究（三）免疫组化实验结果CENPF 在膀胱癌患者的癌旁正常组织中表达弱，膀胱癌组织中 CENPF 主要分布在细胞核中，在细胞膜和细胞间质中也有分布。膀胱癌组织中 CENPF 蛋白表达与正常组织相比，30 例患者膀胱癌组织中 CENPF 表达均明显升高，详见图 4、图 5。在男患者和女患者肿瘤表达值进行比较发现，P>0.05，差异没有统计学意义，说明虽然膀胱癌在不同性别的发病率不同（约为 3:1），但是在膀胱癌患者中，CENPF 在男女不同性别膀胱癌患者的肿瘤组织中表达没有差异（P>0.05）；对不同年龄的比较（分≥65 岁组和＜65 岁组，各 15 例患者）发现 CENPF 在肿瘤组织中的表达没有统计学差异（P>0.05），说明了 CENPF 的表达与患者年龄性别无关。对不同分期、分级膀胱癌组织的免疫组化结果进行分析发现，CENPF 表达与膀胱癌分期相关（P<0.05），表达差异情况见图 6、图 7。由于低级别肿瘤患者较少，经过统计分析 CENPF 与分级相关性不显著。说明 CENPF 在膀胱癌组织中高表达，并与肿瘤分期相关。
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本文编号：2839292