调控Nr4a1的表达对氧化应激状态下肾小球系膜细胞的炎症纤维化作用研究
发布时间：2020-10-21 14:00
目的:探讨在氧化应激状态下,Nr4a1改善肾小球系膜细胞炎症纤维化的生物学作用,同时通过探讨Sirt1对Nr4a1的调控关系,为缓解糖尿病肾病肾小球纤维化提供科学依据。方法:1.在糖尿病肾病条件下,应用免疫共聚焦方法检测C57/LB6糖尿病模型小鼠的肾脏组织炎症纤维化因子的表达,应用免疫荧光法检测氧化应激条件下肾小球系膜细胞中炎症纤维化因子的表达。2.在氧化应激条件下,应用荧光定量PCR方法检测肾小球系膜细胞株(HBZY-1)中Sirt1、Nr4a1、NF-κB的水平,同时应用NMN、Nr4a1的激动剂和抑制剂分别处理肾小球系膜细胞,探讨Sirt1对Nr4a1表达的影响。3.通过免疫共沉淀检测Sirt1与Nr4a1之间的相互作用关系。结果:在野生型小鼠肾小球和肾小囊中纤维化因子α-sma表达均很少,随着糖尿病程度的加重,小鼠的肾脏组织中炎症因子NF-κB和纤维化因子α-sma的表达均明显增多(P0.01),而Sirt1表达却明显减少。在离体高浓度葡萄糖条件下培养的肾小球系膜细胞中,与低浓度葡萄糖(LG)对照组相比,Sirt1和Nr4a1表达明显减少(P0.01),而NF-κB相对表达水平明显升高(P0.01);当加入NMN干预后,细胞中Sirt1和Nr4a1表达则较高糖对照组显著升高(P0.01),而NF-κB相对表达水平明显降低(P0.01)。应用免疫印迹和免疫荧光验证均得到同样的结果。进一步应用免疫共沉淀研究发现,在正常糖浓度条件下,Sirt1与Nr4a1之间确实存在蛋白的相互作用。结论:1.糖尿病小鼠肾小球细胞和氧化应激条件下的肾小球系膜细胞炎症(NF-κB)和纤维化因子(α-sma)的表达均升高,同时Sirt1与Nr4a1表达均受到抑制;2.NMN可以使肾小球系膜细胞中Sirt1表达增高,从而促进Nr4a1表达和减轻DN肾脏炎症纤维化。3.Sirt1可以通过Nr4a1调节NF-κB水平,从而达到缓解肾小球炎症纤维化的作用。
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：
30图1.免疫共聚焦方法检测胰岛素基因突变的转基因糖尿病小鼠肾脏组织 α-sma 和 NF- κ B 的Fig1 Immunoconfocal assay for detection of alpha-sma and NF-kappa B expression in kidneys ofinsulin-mutant transgenic diabetic mice , Mean±SD,n=10,*P<0.05, **P<0.01.图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 α-sma，红色荧光表示 NF-κB。A-D 及 Normal 表示 α和 NF-κB 在正常小鼠肾脏组织的表达， E-H 及 Moderate DN 表示 α-sma 和 NF-κB 中度糖小鼠肾脏组织中的表达，I-L 及 Serious DN 表示 α-sma 和 NF-κB 重度糖尿病小鼠肾脏组织中达。
31图2. 免疫共聚焦方法检测胰岛素基因突变的转基因糖尿病小鼠肾脏组织 NF- κ B 和 Sirt1 的表达Fig2 Detection of expression of NF-kappa B and Sirt1 in diabetic kidney tissue of transgenic mice withinsulin gene mutation by immunoconfocal assay, Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 NF-κB，红色荧光表示 Sirt1。A-D 及 Normal 表示 NF-κB和 Sirt1 在正常小鼠肾脏组织的表达，E-H 及 Serious DN 表示 NF-κB 和 Sirt1 在重度糖尿病小鼠肾脏组织中的表达。通过免疫共聚焦检测胰岛素基因突变转基因糖尿病小鼠的肾脏组织中的 α-sma 和 NF-κB 表达时发现，与野生的正常小鼠(图 1 A-D)相比，糖尿病组小鼠(图 1 E-L)的肾小球明显萎缩；在观察 α-sma 与 NF-κB 在肾脏组织中的定位时发现，α-sma 在野生正常小鼠肾小球和肾小囊几乎不表达(图 1 B，P<0.01)
2.2 免疫荧光法检测氧化应激条件下肾小球系膜细胞中炎症纤维化因子的表达图3. 免疫荧光法检测 NF-κB 和 Fibronectin 在肾小球系膜细胞中的表达Figure 3 Immunofluorescence detection of the expression of NF-kappa B and Fibronectin in glomerularmesangial cells,Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.图中图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 NF-κB，红色荧光表示 Fibronectin。A-D 表示 NF-κB和 Fibronectin 在 200 mmol·L﹣1的高浓度葡萄糖（HG）培养的肾小球系膜细胞中的表达，E-H 表示 NF-κB 和 Fibronectin 在 0.56 mmol·L﹣1的低浓度葡萄糖（LG）培养的肾小球系膜细胞中的表达。
【参考文献】
本文编号：2850207
【学位单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：
30图1.免疫共聚焦方法检测胰岛素基因突变的转基因糖尿病小鼠肾脏组织 α-sma 和 NF- κ B 的Fig1 Immunoconfocal assay for detection of alpha-sma and NF-kappa B expression in kidneys ofinsulin-mutant transgenic diabetic mice , Mean±SD,n=10,*P<0.05, **P<0.01.图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 α-sma，红色荧光表示 NF-κB。A-D 及 Normal 表示 α和 NF-κB 在正常小鼠肾脏组织的表达， E-H 及 Moderate DN 表示 α-sma 和 NF-κB 中度糖小鼠肾脏组织中的表达，I-L 及 Serious DN 表示 α-sma 和 NF-κB 重度糖尿病小鼠肾脏组织中达。
31图2. 免疫共聚焦方法检测胰岛素基因突变的转基因糖尿病小鼠肾脏组织 NF- κ B 和 Sirt1 的表达Fig2 Detection of expression of NF-kappa B and Sirt1 in diabetic kidney tissue of transgenic mice withinsulin gene mutation by immunoconfocal assay, Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 NF-κB，红色荧光表示 Sirt1。A-D 及 Normal 表示 NF-κB和 Sirt1 在正常小鼠肾脏组织的表达，E-H 及 Serious DN 表示 NF-κB 和 Sirt1 在重度糖尿病小鼠肾脏组织中的表达。通过免疫共聚焦检测胰岛素基因突变转基因糖尿病小鼠的肾脏组织中的 α-sma 和 NF-κB 表达时发现，与野生的正常小鼠(图 1 A-D)相比，糖尿病组小鼠(图 1 E-L)的肾小球明显萎缩；在观察 α-sma 与 NF-κB 在肾脏组织中的定位时发现，α-sma 在野生正常小鼠肾小球和肾小囊几乎不表达(图 1 B，P<0.01)
2.2 免疫荧光法检测氧化应激条件下肾小球系膜细胞中炎症纤维化因子的表达图3. 免疫荧光法检测 NF-κB 和 Fibronectin 在肾小球系膜细胞中的表达Figure 3 Immunofluorescence detection of the expression of NF-kappa B and Fibronectin in glomerularmesangial cells,Mean±SD,n=10,*P<0.05,**P<0.01.图中图中蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示 NF-κB，红色荧光表示 Fibronectin。A-D 表示 NF-κB和 Fibronectin 在 200 mmol·L﹣1的高浓度葡萄糖（HG）培养的肾小球系膜细胞中的表达，E-H 表示 NF-κB 和 Fibronectin 在 0.56 mmol·L﹣1的低浓度葡萄糖（LG）培养的肾小球系膜细胞中的表达。
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 于天水;官大威;马勇;张冬梅;;肌成纤维细胞在纤维化疾病中的研究进展[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2013年02期
2 尹德海;梁晓春;;从肾小球系膜细胞表型转化谈中医药防治糖尿病肾病机制研究思路[J];中国中医药信息杂志;2008年06期
本文编号：2850207
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