膀胱肿瘤微环境模拟平台构建及实验研究

发布时间：2017-04-04 12:16

  本文关键词：膀胱肿瘤微环境模拟平台构建及实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:构建一个集膀胱肿瘤细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞联合培养的微流控平台(芯片),以多种细胞联合培养为基础,实现体外状态下膀胱肿瘤微环境模拟。在此基础上对微环境中间质细胞的表型进行观测,同时探究肿瘤对化疗药物敏感性。方法:应用微流控技术构建一个由多个细胞培养室相互连通的微环境模拟平台(芯片)。该平台由基质胶灌注结构单元、细胞培养室及营养液灌流通道构成。膀胱肿瘤细胞及多种间质细胞分别接种于四个细胞培养室进行联合培养。各种细胞产生的可溶性细胞因子及代谢物可扩散至整个平台。应用免疫荧光技术分别对成纤维细胞的α-SMA因子、内皮细胞的CD105因子及巨噬细胞的Arg-1因子的表达量进行检测。依据膀胱肿瘤患者临床化疗方案,结合该微环境模拟平台,检测膀胱肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性差异。结果:细胞形态学观察显示细胞在该平台生长稳定,膀胱肿瘤细胞在三维培养环境中出现环状生长的趋势。微环境模拟平台中巨噬细胞在微桥中有迁移趋势。与对照组相比,纤维细胞的α-SMA因子高表达,内皮细胞的CD105因子高表达,巨噬细胞的Arg-1因子高表达。基于该平台,膀胱肿瘤T24细胞经不同种类及不同配伍的化疗药物作用后,细胞死亡计数(每100个)有差异。结论:本研究通过肿瘤细胞与多种间质细胞联合培养,依托微流控技术,在体外环境下成功构建了膀胱肿瘤微环境模拟平台。在该平台中,微环境模拟状态下间质细胞生物学表型有活化趋势。该模拟平台实现了膀胱肿瘤T24细胞对多种化疗药物作用敏感性的差异检测,为进一步探究肿瘤微环境对化疗药物的抗药性机制提供了良好平台。
【关键词】：膀胱癌 微环境 联合培养 药物敏感性 微流控平台
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 1.材料与试剂8-10
• 1.1 实验细胞及来源8
• 1.2 实验试剂及来源8
• 1.3 主要实验仪器8-10
• 2.实验方法10-16
• 2.1 微环境模拟平台（芯片）结构设计10
• 2.2 微环境模拟平台（芯片）制作10-12
• 2.2.1 光刻阳模制作11
• 2.2.2 PDMS基片制作11-12
• 2.3 平台（芯片）有效性检测12-13
• 2.3.1 基质胶流道加注基质胶12
• 2.3.2 营养液灌流通道的分子弥散效果检测12
• 2.3.3 细胞培养室间分子的弥散效果检测12-13
• 2.4 细胞培养13
• 2.5 微环境模拟平台（芯片）中细胞接种及细胞活化因子检测13-14
• 2.5.1 细胞接种13-14
• 2.5.2 细胞活化因子检测14
• 2.6 膀胱肿瘤对化疗药物敏感性检测14-16
• 2.6.1 化疗药物灌流液配制14-15
• 2.6.2 T24细胞对化疗药物敏感性检测15-16
• 3. 结果16-20
• 3.1 平台构建及分子弥散有效性16
• 3.1.1 平台构建16
• 3.1.2 平台的分子弥散有效性检测16
• 3.2 细胞形态学观察16-18
• 3.2.1 细胞生长17
• 3.2.2 膀胱肿瘤T24细胞网状结构形成17
• 3.2.3 巨噬细胞迁移17-18
• 3.3 微环境模拟平台中间质细胞的活化18-19
• 3.4 微环境模拟平台中T24细胞对化疗药物的敏感性19-20
• 4. 讨论20-22
• 结论22-23
• 参考文献23-26
• 综述26-37
• 参考文献34-37
• 攻读学位期间的研究成果37-38
• 致谢38-39

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