NLRP3在小鼠肾缺血再灌注损伤中的作用及MCC950应用研究

发布时间：2020-10-26 13:50

　　 目的:缺血再灌注损伤是一个涉及多种因素相互作用的炎症级联反应过程,其与肾移植术后早期的移植肾功能延迟恢复和急性排斥反应等密切相关,目前对其机制研究尚不明确。最近研究发现,NLRP3作为炎症级联反应的关键分子,其在缺血再灌注损伤中发挥重要的作用,但相关研究多集中在肝脏和心脏等器官,而在肾脏方面的研究较少,因此,NLRP3炎症小体在肾缺血再灌注损伤中的作用需要更多研究加以证实。另有研究发现,一种新型小分子化合物MCC950可以通过特异性抑制NLRP3的表达,有效改善心脏缺血再灌注损伤和各种炎症性疾病,然而目前国内外仍没有MCC950在肾脏IRI应用效果的研究,因此,我们希望通过本研究探讨NLRP3炎症小体在肾缺血再灌注损伤中的作用以及MCC950在改善肾缺血再灌注损伤中的应用效果。方法:第一部分,采用8-10周龄的雄性C57BL/6小鼠,体重20~25g,通过夹毕双侧肾蒂建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型,再灌注后不同时间点获取血液标本和双侧肾脏组织标本,检测血清SCr、BUN反映肾功能变化情况,肾组织病理切片染色观察肾脏损伤程度,Western Blot检测NLRP3蛋白表达。第二部分,采用8-10周龄的雄性C57BL/6小鼠,体重20~25g,尾静脉注射NLRP3特异性抑制剂MCC950进行预处理,然后建立小鼠肾缺血再灌注损伤模型,再灌注后24小时获取血液标本及双侧肾脏,检测血清Cr、BUN反映肾功能变化,肾组织病理切片染色观察肾脏损伤程度,Western Blot检测NLRP3蛋白和caspase-1蛋白表达,ELISA检测肾组织IL-1β表达。结果:1、肾脏病理切片染色发现,小鼠缺血再灌注后1h、6h、12h、24h、48h均出现不同程度的肾脏损伤,其中24小时损伤程度最重,肾小管结构消失,部分呈现不同程度的片状或灶状坏死,管腔内可见管型形成。2、再灌注后血清Cr、BUN均明显升高,并在24小时达到高峰。3、通过Western Blot分析,我们发现NLRP3在再灌注后表达明显升高,并在12小时达到高峰。4、与再灌注后24小时组相比,MCC950干预组肾组织损伤程度明显减轻,肾功能得到改善,caspase-1、IL-1β表达下降。结论:1、肾缺血再灌注后,NLRP3表达显著升高,通过MCC950抑制其表达后,肾功能和肾脏病理损伤得到显著改善,证明NLRP3在肾缺血再灌注损伤中发挥重要作用。2、MCC950可以通过有效抑制NLRP3蛋白表达,显著减轻再灌注导致的肾脏损伤,说明MCC950有望成为治疗肾缺血再灌注损伤的靶向药物。3、再灌注后NLRP3蛋白下游分子caspase-1、IL-1β表达升高,抑制NLRP3后,caspase-1、IL-1β表达表达也相应下降,提示NLRP3可能通过NLRP3/caspase-1/IL-1β通路发挥作用。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R692
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本文编号：2857082