沉默Notch-1对膀胱癌EMT影响的体外研究

发布时间：2017-04-06 16:14

  本文关键词：沉默Notch-1对膀胱癌EMT影响的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:体外实验探讨沉默Notch-1受体对膀胱癌EMT的影响及分子机制。方法:将Notch-1 shRNA及阴性对照组用Lip-2000转染膀胱癌5637细胞株,倒置显微镜下观察5637细胞生长状态以及形态的变化,并且观察转染效率;运用qRT-PCR及western blot检测转染效率;qRT-PCR及western blot技术检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA及蛋白表达变化;流式细胞仪检测凋亡率变化情况;transwell评估5637细胞侵袭能力的改变。结果:实验组培养的膀胱癌细胞数量明显下降,细胞之间的连接减少,分布更分散,细胞皱缩、变小,荧光显示转染效率为80%;qRT-PCR及western blot检测转染效率结果显示:转染Notch-1 shRNA细胞,Notch-1的mRNA和蛋白表达显著性下调(P0.05);qRT-PCR及western blot检测EMT标记物的结果显示,转染Notch-1 shRNA后,vimentin的mRNA及蛋白表达显著下调(Ρ0.05),E-cadherin、N-cadherin的mRNA及蛋白表达显著上调(Ρ0.05);流式细胞术结果显示:实验组的早、中晚期凋亡率均显著上调,差异均具有统计学意义(P0.05);transwell表明转染Notch-1 shRNA细胞的侵袭能力显著下调(P0.05)。结论:通过沉默Notch-1受体部分阻断Notch信号通路,进而抑制膀胱癌EMT进程;同时降低膀胱癌细胞抗凋亡能力和侵袭力。
【关键词】：膀胱癌 Notch-1 EMT 基因沉默
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要3-4
• abstract4-9
• 第1章 引言9-12
• 第2章 材料与方法12-23
• 2.1 材料12-13
• 2.1.1 细胞株来源12
• 2.1.2 主要试剂12-13
• 2.1.3 主要仪器与设备13
• 2.2 实验方法与步骤13-22
• 2.2.1 主要试剂的配制13-14
• 2.2.2 细胞培养14-16
• 2.2.3 转染细胞16-17
• 2.2.4 转染 48h后，qRT-PCR检测膀胱癌细胞Notch-1 的mRNA表达17-19
• 2.2.5 转染 48h后，qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达19
• 2.2.6 转染 48h后，western blot检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 的蛋白表达19-21
• 2.2.7 流式细胞仪检测膀胱癌细胞凋亡情况21
• 2.2.8 Transwell检测细胞侵袭力的改变21-22
• 2.3 统计学处理22-23
• 第3章 结果23-29
• 3.1 观察转染后各组5637细胞的形态学变化以及细胞转染效率23-24
• 3.2 转染 48h后，qRT-PCR检测Notch-1 的mRNA表达24
• 3.3 转染 48h后，qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达变化24-26
• 3.4 转染 48h后，western blot检测标记物E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Notch-1 蛋白表达变化26
• 3.5 细胞转染 48h后，，流式细胞仪检测细胞凋亡率变化情况26-27
• 3.6 转染 48h后，Transwell检测5637细胞侵袭变化情况27-29
• 第4章 讨论29-31
• 第5章 结论和展望31-32
• 5.1 结论31
• 5.2 展望31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-36
• 综述36-42
• 参考文献41-42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吉鸿;卢桂芳;袁甫军;单涛;陆宏伟;黎一鸣;高秀梅;黄涛;;姜黄素通过调控上皮间质转化抑制乳腺癌侵袭转移的体外研究[J];中国现代普通外科进展;2014年11期

2 郭tb;张瑾;;Notch信号通路在乳腺癌干细胞中的研究进展[J];中国肿瘤临床;2014年14期

3 马宝杰;李海波;张昌文;蔡启亮;李刚;徐勇;;MAP4K4在膀胱癌中的表达及对膀胱癌细胞株T24生物学行为的影响[J];中华泌尿外科杂志;2014年06期

4 石萌;南兴建;李文静;王亚东;郑浩轩;;Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移[J];现代消化及介入诊疗;2014年02期

5 刘晗;王玲莉;程剑剑;王存真;;γ-分泌酶抑制剂对大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的抑制作用[J];中华实验外科杂志;2014年04期

6 崔瑶;李珊珊;;缺氧、上皮间质转化与肿瘤[J];中华病理学杂志;2014年03期

7 袁玲;王朝霞;;上皮-间质转化与肿瘤耐药性的研究进展[J];中国肿瘤临床;2013年17期

8 霍西茜;王宁;;钙粘素蛋白-E与肿瘤发生及生物学行为相关性的研究进展[J];现代肿瘤医学;2013年08期

9 韩苏军;张思维;陈万青;李长岭;;中国膀胱癌发病现状及流行趋势分析[J];癌症进展;2013年01期

10 魏光兵;常远鸿;王康;仇广林;柴明明;;靶向沉默Notch1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2012年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 刘志欢;γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对膀胱癌上皮—间质转化（EMT）的影响[D];南昌大学医学院;2013年

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本文编号：289210