TGF-β1通过ERK和JNK信号通路诱导Fascin1表达促进肾癌细胞的迁移及侵袭

发布时间：2020-11-22 10:01

　　 目的:探索TGF-β1诱导Fascin1的表达促进肾癌细胞迁移及侵袭的机制。方法:利用RT-PCR技术检测加入TGF-β1前后Fascin1的mRNA水平的变化。通过Western blotting技术检测加入TGF-β1前后Fascin1及EMT相关蛋白水平的变化。用光学显微镜及细胞骨架染色观察加入TGF-β1后细胞形态及骨架的变化。应用Fascin1 siRNA降低Fascin1的表达水平。通过划痕实验分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA处理肾癌细胞后,细胞的迁移能力的变化。应用Transwell分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA处理肾癌细胞后,细胞的侵袭能力的变化。给予769-P细胞及OSRC细胞ERK及JNK信号通路抑制剂处理后,用Western blotting检测加入TGF-β1前后Fascin1的表达水平的变化。结果:相较于对照组,加入TGF-β1后Fascin1的表达水平显著增加(P0.05)。同时,在加入TGF-β1后,在光学显微镜的观察下,769-P及OSRC细胞的形态更加趋向于长梭形,与此相对应的,在荧光显微镜的观察下,细胞的骨架也会发生重构,形成一个长的束状纤维状结构,沿细胞长轴纵向排列;同时,经过Western blotting检测得出,与EMT发生相关的蛋白的水平也发生了相应的阳性改变(P0.05)。经过划痕实验分析,在加入TGF-β1后,NT组及si-control组的愈合率显著增加(P0.05),但是经过Fascin1 siRNA预先处理后,由于Fascin1的表达水平下降,再加入TGF-β1后,细胞的愈合率并没有出现同样的变化。同样的,经过Transwell分析,加入TGF-β1后,细胞的侵袭能力显著增加(P0.05),但是经过Fascin1 siRNA预先处理后,同样由于Fascin1的表达水平下降,细胞的侵袭能力并没有明显的改变。与此同时,还发现在TGF-β1诱导Fascin1的表达水平增加的同时,相应的JNK及ERK的磷酸化水平也增加(P0.05),而且在经过JNK及ERK信号通路相应抑制剂SP600125及FR180204的预先处理后,会显著抑制TGF-β1对Fascin1表达水平的促进作用。结论:TGF-β1会通过ERK及JNK信号通路促进Fascin1的表达水平,进而通过促进肾癌细胞迁移及侵袭的能力,促进肾癌的发生。
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.11
【部分图文】：

中国医科大学硕士学位论文3 结果GF-β1 会促进 Fascin1 的表达过 RT-PCR 及 Western blotting 检测 ，加入 TGF-β1 后，肾癌细胞系中 Fascin1 的表达相较于对照组(0ng/ml)都有了明显的增加（**P。如下图所示（图 1，2）

经过 RT-PCR 及 Western blotting 检测 ，加入 TGF-β1 后，肾癌细胞系 76C 中 Fascin1 的表达相较于对照组(0ng/ml)都有了明显的增加（**P<0ml）。如下图所示（图 1，2）图 1 RT-PCR 检测 TGF-β1 对 Fascin1 表达的影响

中国医科大学硕士学位论文.2 Fascin1 siRNA 能显著抑制 Fascin1 表达经 RT-PCR 及 Western blotting 检测，加入 Fascin1 siRNA 后，相较于 NT 组i-control 组，Fascin1 的表达水平明显下降，同时，再次加入 TGF-β1 后，Fasc表达水平没有明显的变化（#P<0.05 VS NT 和 Si-control）。如下所示（图 3，4
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本文编号：2894527