糖尿病大鼠肾组织差异表达的AGE-修饰蛋白研究

发布时间：2017-04-19 11:03

  本文关键词：糖尿病大鼠肾组织差异表达的AGE-修饰蛋白研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的糖基化是一种重要且常见的蛋白质修饰方式,被修饰后的蛋白质其结构和功能都可能发生变化,蛋白质的异常糖基化与糖尿病及其并发症的发生密切相关,本研究通过对糖尿病大鼠肾脏组织中晚期糖基化终末产物(Advanced glycated end-products, AGE)-修饰的蛋白质进行分析和鉴定,为糖尿病肾病患者的早期诊断和治疗探索新的分子标志物。方法1.SPF级8周龄健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠50只,随机分组法分为：糖尿病3月组20只、糖尿病1月组17只及正常对照组13只。2.2%链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ) 55mg/kg进行腹腔注射,制造糖尿病大鼠模型,对照组注射等剂量的柠檬酸缓冲液,分别于注药后第3天及第6天测定尾静脉全血血糖,两次血糖均≥16.7mmol/L造模成功,最后获得糖尿病3月及1月组大鼠分别为14只、13只。3.对正常及糖尿病大鼠肾脏组织制作普通切片及超薄切片,分别在光镜及电镜下观察其显微结构及超微结构的变化。4.制备大鼠肾组织匀浆,ELISA分析各组大鼠肾组织中的AGE-修饰蛋白浓度,Pearson相关性分析糖尿病组大鼠血糖与肾组织AGE-修饰蛋白浓度的相关性。5.提取肾脏组织总蛋白并测定其浓度,通过1-DE/Western-blot分离各组大鼠肾组织中的AGE-修饰蛋白, quantity-one4.6.2软件分析对照组、糖尿病1月及3月组大鼠肾组织中AGE-修饰蛋白的表达差异。6.对表达有差异的AGE-修饰蛋白进行胶内酶解及液相色谱-质谱／质谱鉴定,最后用Mascot进行数据库检索。结果1.肾脏组织病理形态学改变(1)光镜下结构改变：与正常对照组大鼠相比,糖尿病1月组大鼠肾小球系膜区局灶节段增宽,以系膜基质增多为主,伴或不伴有系膜细胞的增生,糖尿病3月组大鼠肾小球系膜区增宽,仍以局灶节段性病变为主,但较糖尿病1月组更明显,并且出现毛细血管基底膜的局灶节段增厚。(2)电镜下结构改变：与正常对照组大鼠相比,糖尿病1月组大鼠肾脏系膜基质增多,肾脏内皮细胞及系膜细胞核未见染色质凝集,糖尿病3月组大鼠肾脏系膜基质明显增多,肾小球内皮细胞及系膜细胞核染色质高度凝集与边集,呈现凋亡细胞的形态学改变,且出现基底膜不均匀的增厚,部分足突缺失,与基底膜分离。2. ELISA分析显示,与正常大鼠肾组织AGE-修饰蛋白浓度[(332.3+51.4)ug/ml]相比较,糖尿病1月及3月组大鼠肾组织AGE-修饰蛋白浓度[(420.9±53.0)ug/ml、(618.8±86.1) ug/ml]显著增高(p0.05, p0.001);糖尿病3月组大鼠AGE-修饰蛋白浓度[(618.8±86.1)ug/ml]显著高于1月组大鼠AGE-修饰蛋白浓度[(420.9±53.0) ug/ml] (p0.001); Pearson相关性分析提示糖尿病大鼠肾组织中AGE-修饰蛋白的浓度与血糖浓度显著正相关(r=0.4303,p=0.025).3.1-DE/Western-blot、quantity-one4.6.2软件分析显示糖尿病组大鼠肾组织中4种AGE-修饰蛋白表达水平上调,另外,上述4种蛋白在糖尿病3月组的表达水平显著高于糖尿病1月组。4. Q Exactive质谱仪分析显示上述4种表达上调的AGE-修饰蛋白分别是：肌动蛋白、血清转铁蛋白、过氧化氢酶及血清白蛋白。结论糖尿病大鼠肾组织中AGE-修饰蛋白的浓度及表达水平增加,并且与糖尿病病程相关,有4种AGE-修饰蛋白的表达水平增加,它们分别是：肌动蛋白、血清转铁蛋白、过氧化氢酶及血清白蛋白。糖基化可能影响了这些蛋白质的结构及功能,导致糖尿病的肾脏损伤,其具体机制尚待进一步研究。
【关键词】：糖尿病 糖尿病肾损伤 晚期糖基化终末产物 蛋白质
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-20
• 1.1 研究背景10-19
• 1.1.1 AGEs致糖尿病肾脏损伤机制的研究进展11-16
• 1.1.2 蛋白质组学概述16-18
• 1.1.3 蛋白质组学在糖尿病及糖尿病肾脏损伤中的前期研究18-19
• 1.2 本研究的特色19-20
• 第二章 糖尿病大鼠模型的建立20-24
• 2.1 动物、试剂及仪器20-21
• 2.1.1 动物20
• 2.1.2 试剂20
• 2.1.3 仪器20
• 2.1.4 主要溶液的配置20-21
• 2.2 方法21
• 2.2.1 动物模型的建立21
• 2.2.2 数据统计21
• 2.3 结果21-22
• 2.4 讨论22-24
• 第三章 糖尿病大鼠肾损伤的病理学研究及肾组织AGEs定量研究24-33
• 3.1 试剂及仪器24-25
• 3.1.1 试剂24
• 3.1.2 仪器24
• 3.1.3 主要溶液的配制24-25
• 3.2 方法25-27
• 3.2.1 肾脏取材25
• 3.2.2 光镜切片的制备25
• 3.2.3 电镜切片的制备25
• 3.2.4 肾脏匀浆的制备25
• 3.2.5 酶联免疫吸附试验25-27
• 3.2.6 统计学分析27
• 3.3 结果27-30
• 3.3.1 光镜结果27-28
• 3.3.2 电镜结果28-29
• 3.3.3 Elisa结果29-30
• 3.4 讨论30-33
• 第四 章 正常及糖尿病大鼠肾组织的免疫印迹及蛋白质组学研究33-45
• 4.1 试剂及仪器33-35
• 4.1.1 试剂33
• 4.1.2 仪器33-34
• 4.1.3 主要溶液的配置34-35
• 4.2 方法35-39
• 4.2.1 肾脏组织总蛋白的提取36
• 4.2.2 BCA蛋白定量36-37
• 4.2.3 蛋白印迹法37-38
• 4.2.4 凝胶染色及图像扫描38-39
• 4.2.5 液相色谱-质谱/质谱39
• 4.3 结果39-41
• 4.3.1 蛋白定量结果39-40
• 4.3.2 western blot结果40-41
• 4.3.3 1-DE结果41
• 4.3.4 质谱鉴定的结果41
• 4.4 讨论41-44
• 4.5 结论44-45
• 参考文献45-51
• 在校期间研究成果51-52
• 中英文缩略词52-54
• 致谢54

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1 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;1998年10期

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6 太田康晴,庄祥云;糖尿病[J];日本医学介绍;2000年08期

7 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年06期

8 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年08期

9 ;糖尿病[J];国外科技资料目录.医药卫生;2000年11期

10 林兰;倪青;董彦敏;;糖尿病中西医结合研究的思路与方法[J];医学研究通讯;2001年09期

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1 吴东方;庄跃宏;陈秀芳;赵丽娜;杨晓东;唐茂林;;胰岛素依赖型糖尿病对大鼠随意皮瓣存活能力的影响[A];中国解剖学会2012年年会论文文摘汇编[C];2012年

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4 刘铜华;吕仁和;高彦彬;;中医药防治糖尿病及并发症的作用途径[A];糖尿病（消渴病）中医诊治荟萃——全国第五次中医糖尿病学术大会论文集[C];1999年

5 石凤英;王尧;;灵芝对糖尿病大鼠肾脏形态学及微量白蛋白尿的作用[A];中国康复医学会第三次康复治疗学术大会论文汇编[C];2002年

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7 仝小林;李洪皎;;糖络并重治疗2型糖尿病[A];第九次全国中医糖尿病学术大会论文汇编[C];2006年

8 李筱荣;李艳;刘巨平;袁佳琴;;糖尿病大鼠血—视网膜屏障损伤的实验研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

9 杨毅;陈江华;王晶晶;秦岭;;雷帕霉素对糖尿病大鼠肾脏组织增殖和肥大的抑制作用[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

10 祁少海;刘坡;舒斌;谢举临;徐盈斌;黄勇;毛任翔;刘旭盛;;不同深度糖尿病大鼠烫伤模型的制备[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年

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2 本报记者 王乐羊;中西医结合防治糖尿病大有可为[N];中国中医药报;2002年

3 北京协和医院 梁晓春;对中医治糖尿病并发症研究的思考[N];中国中医药报;2011年

4 刘燕玲;肥胖是糖尿病的源头[N];健康报;2006年

5 仝小林;糖尿病慢性并发症论治[N];中国中医药报;2003年

6 汪敏;糖尿病皮肤易损元凶找到[N];卫生与生活报;2003年

7 林兰;中西医结合治疗糖尿病的前景[N];中国中医药报;2007年

8 北京协和医院中医科主任 梁晓春;糖尿病周围神经病变的中西医治疗进展[N];中国医药报;2009年

9 本报记者 刘艳芳;糖尿病干预不能忽视抗氧化[N];中国食品报;2012年

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