围生期BPA暴露对小鼠精液参数及睾丸支持细胞连接蛋白表达的影响

发布时间：2017-04-23 15:01

  本文关键词：围生期BPA暴露对小鼠精液参数及睾丸支持细胞连接蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察围生期暴露于不同浓度双酚A(BPA)对雄性小鼠精液参数及睾丸支持细胞连接蛋白表达的影响,探讨BPA致男性不育的机制。方法:阴道涂片显微镜检查精子确定受孕母鼠,受孕的母鼠随机分为对照组和实验组(2mg/kg,20mg/kg,200mg/kg BPA),在母鼠受孕的第12天至产后的第21天分别用浓度分别为0,2,20,200mg/kg的BPA灌胃。将子代雄性小鼠饲养至产后第80天处死。取各组小鼠左侧附睾用于检测其精液参数(精液计数及活力)的变化,左侧睾丸用于HE染色镜下观察睾丸组织病理学改变和免疫组化检测睾丸支持细胞连接蛋白(Cx43、Occludin及N-cadherin)的表达变化,右侧睾丸用于Western印迹检测睾丸支持细胞连接蛋白(Cx43、Occludin及N-cadherin)的表达变化。结果:与对照组精子计数[(175.75±18.01)×106]相比,3种BPA浓度组精子计数[2mg/kg,(146.68±8.67)×106;20mg/kg,(136.10±8.75)×106;200mg/kg,(112.42±12.45)×106]均明显降低(P0.05)。并且随着BPA浓度的升高精子计数降低。精子活力也发生同样的变化。小鼠睾丸组织HE染色显示:与对照组相比,2mg/kg BPA组生精小管结构较为清晰,各级生精细胞排列基本有序,官腔成熟精子减少,无脱落生精细胞。20mg/kg BPA组生精小管结构基本清晰,各级生精细胞排列基本有序,官腔成熟精子明显减少,可见明显脱落生精细胞。200mg/kg BPA组生精小管结构紊乱,各级生精细胞排列明显减少,排列紊乱,官腔成熟精子明显减少,可见明显脱落生精细胞。免疫组化及Western印迹结果显示:睾丸支持细胞连接蛋白的表达随着BPA浓度升高呈现降低趋势。结论:围生期BPA暴露降低睾丸支持细胞连接蛋白表达,推测BPA通过影响睾丸支持细胞连接蛋白的表达影响精子发生过程。
【关键词】：双酚A 围生期 精子发生 支持细胞连接蛋白
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R698.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-7
• 第一章 材料和试剂7-9
• 1.1 实验动物7
• 1.2 主要实验试剂7-8
• 1.3 主要仪器设备与工具8-9
• 第二章 实验方法9-13
• 2.1 动物饲养及实验分组9
• 2.2 精子计数和活力检测9
• 2.3 睾丸HE染色9-10
• 2.4 检测Cx43、Occludin及N-cadherin表达水平10-12
• 2.4.1 免疫组化法操作步骤10
• 2.4.2 Western印迹检测操作步骤10-12
• 2.4.2.1 总蛋白的提取与定量10-11
• 2.4.2.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）11
• 2.4.2.3 转膜和孵育抗体11-12
• 2.4.2.4 化学发光、显影、定影、凝胶图象数据分析12
• 2.5 统计学方法12-13
• 第三章 实验结果13-17
• 3.1 精子计数和活力测定结果13
• 3.2 睾丸组织病理学检查13-14
• 3.3 BPA对Cx43, Occludin和N-cadherin表达的影响14-17
• 第四章 讨论17-18
• 结论18-19
• 参考文献19-22
• 综述22-34
• 参考文献29-34
• 攻读学位期间的研究成果34-35
• 致谢35-36

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本文编号：322551