GSK3β调控非Keap1依赖的Nrf2抗氧化反应参与急性肾损伤到慢性肾脏病转变的研究
发布时间：2021-09-28 00:24
慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）具有发病率逐年增高、治疗手段有限、转归预后差、医疗费用昂贵等特点,已成为全球范围内的公共健康问题。2012年对我国成年人进行的一项大型横断面研究结果显示CKD发病率为10.8%,累及大概1.19亿人群[1]。而流行性病学研究表明急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是CKD的独立危险因素,急性肾损伤的程度、发生频率及持续时间都与CKD进展有关,AKI到CKD的转变是进展性肾功能恶化的重要病因。AKI到CKD转变是复杂的病理生理过程,目前研究包括肾小管细胞不完全再生（发生EMT和G2/M细胞周期停滞等）、持续慢性炎症反应（M1巨噬细胞表型转变为M2）、线粒体功能障碍、遗传学修饰（DNA甲基化和microRNA表达）、RAS激活、内皮细胞失功能和微血管稀疏等[2]。肾小管上皮细胞是新陈代谢极度活跃细胞,对氧化还原反应失衡尤其敏感,大量研究表明肾小管上皮细胞氧化损伤在AKI、AKI-CKD以及CKD的发生发展中均具有重要作用[3]。在体内维...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1.1.：叶酸肾损伤小鼠模型回顾性研究实验流程图
图 4.1.1.2.：叶酸损伤后低肌酐组和高肌酐组肾脏形态和功能变化对比。图 A：叶酸损伤第 28 天对照组、低肌酐组、高肌酐组肾脏形态学改变。图 B：叶酸损伤 28 天时低肌酐组与高肌酐组肾重体重比值。**P<0.01vs 低肌酐组。图 C：高肌酐组与低肌酐组血肌酐变化：根据第 28 天时所有小鼠的血肌酐中位数分为两组，再回顾性统计所有小鼠在不同时间点的肌酐值。*P<0.05 vs 低肌酐组。4.1.2 小鼠急性肾损伤的转归与肾小管氧化应激损伤程度有关为了进一步探讨叶酸诱导的 AKI 进展为 CKD 的发病机制，如图 4.1.2.，与低肌酐组相比，高肌酐组小鼠肾脏胶原纤维增多，纤维粘连蛋白（Fibronectin ，FN）表达也增强，表明急性肾脏损伤后高肌酐组的肾脏发生纤维化病变，已具备慢性肾脏病的典型病理改变；而与溶剂对照组相比，低肌酐组 FN 和胶原Ⅰ的表达也有所增多，表明低肌酐组也有一定的慢性损伤。磷酸化组蛋白 H3（p-Histone H3）是评估有丝分裂停滞，细胞周期异常的重要指标，免疫组化结果显示 p-Histone H3在肾小管上皮细胞中有阳性表达（三角箭头所示），与低肌酐组比较，高肌酐组阳性表达增多，这与 western blot 结果一致。8-OHdG 和硝基酪氨酸（Nitrotyrosine）作为机体氧化应激损伤的重要生物学指标，免疫组化
图 4.1.2.：在叶酸诱导的小鼠肾损伤模型中，肾小管上皮细胞氧化应激损伤程度与肾脏预后相关。A：在叶酸损伤第 28 天，肾组织标本进行 Masson's trichrome 染色检测胶原纤维的变化（标尺为 200μm）；Fibronectin 免疫荧光染色检测其表达（标尺为 50 μm）；p-HistoneH3 免疫组化染色检测其表达（标尺为 20 μm），黑色三角箭头显示为肾小管上皮细胞中p-Histone H3 阳性着色；8-OHdG 免疫组化染色检测肾组织氧化应激损伤（标尺为 50 μm）。B：叶酸损伤第 28 天将各组肾组织匀浆，用 western blot 方法检测 FN、CollagenⅠ、p-HistoneH3 和 Nitrotyrosine 的蛋白表达水平。4.2 在叶酸诱导的小鼠肾损伤前瞻性分析研究中，AKI 到 CKD 的进展与肾小管上皮细胞持续的氧化应激损伤有关4.2.1 叶酸诱导的小鼠肾损伤前瞻性分析研究为了进一步研究前期实验结果，我们设计了叶酸诱导肾损伤模型的前瞻性研究。图 4.2.1.1 所示，为了让小鼠的急性肾损伤程度尽可能一致，避免因急性损伤程度不同导致的长期预后不同，在损伤后的第 3天急性期时收集所有小鼠血标本，检测血肌酐，选择血肌酐值在 2.0-2.4 之间的小鼠进行长期研究，并在入选的小鼠中随机选择 5只处死，留取肾组织等标本备用。在第 7、14、28天时间
本文编号：3410894
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：107 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1.1.：叶酸肾损伤小鼠模型回顾性研究实验流程图
图 4.1.1.2.：叶酸损伤后低肌酐组和高肌酐组肾脏形态和功能变化对比。图 A：叶酸损伤第 28 天对照组、低肌酐组、高肌酐组肾脏形态学改变。图 B：叶酸损伤 28 天时低肌酐组与高肌酐组肾重体重比值。**P<0.01vs 低肌酐组。图 C：高肌酐组与低肌酐组血肌酐变化：根据第 28 天时所有小鼠的血肌酐中位数分为两组，再回顾性统计所有小鼠在不同时间点的肌酐值。*P<0.05 vs 低肌酐组。4.1.2 小鼠急性肾损伤的转归与肾小管氧化应激损伤程度有关为了进一步探讨叶酸诱导的 AKI 进展为 CKD 的发病机制，如图 4.1.2.，与低肌酐组相比，高肌酐组小鼠肾脏胶原纤维增多，纤维粘连蛋白（Fibronectin ，FN）表达也增强，表明急性肾脏损伤后高肌酐组的肾脏发生纤维化病变，已具备慢性肾脏病的典型病理改变；而与溶剂对照组相比，低肌酐组 FN 和胶原Ⅰ的表达也有所增多，表明低肌酐组也有一定的慢性损伤。磷酸化组蛋白 H3（p-Histone H3）是评估有丝分裂停滞，细胞周期异常的重要指标，免疫组化结果显示 p-Histone H3在肾小管上皮细胞中有阳性表达（三角箭头所示），与低肌酐组比较，高肌酐组阳性表达增多，这与 western blot 结果一致。8-OHdG 和硝基酪氨酸（Nitrotyrosine）作为机体氧化应激损伤的重要生物学指标，免疫组化
图 4.1.2.：在叶酸诱导的小鼠肾损伤模型中，肾小管上皮细胞氧化应激损伤程度与肾脏预后相关。A：在叶酸损伤第 28 天，肾组织标本进行 Masson's trichrome 染色检测胶原纤维的变化（标尺为 200μm）；Fibronectin 免疫荧光染色检测其表达（标尺为 50 μm）；p-HistoneH3 免疫组化染色检测其表达（标尺为 20 μm），黑色三角箭头显示为肾小管上皮细胞中p-Histone H3 阳性着色；8-OHdG 免疫组化染色检测肾组织氧化应激损伤（标尺为 50 μm）。B：叶酸损伤第 28 天将各组肾组织匀浆，用 western blot 方法检测 FN、CollagenⅠ、p-HistoneH3 和 Nitrotyrosine 的蛋白表达水平。4.2 在叶酸诱导的小鼠肾损伤前瞻性分析研究中，AKI 到 CKD 的进展与肾小管上皮细胞持续的氧化应激损伤有关4.2.1 叶酸诱导的小鼠肾损伤前瞻性分析研究为了进一步研究前期实验结果，我们设计了叶酸诱导肾损伤模型的前瞻性研究。图 4.2.1.1 所示，为了让小鼠的急性肾损伤程度尽可能一致，避免因急性损伤程度不同导致的长期预后不同，在损伤后的第 3天急性期时收集所有小鼠血标本，检测血肌酐，选择血肌酐值在 2.0-2.4 之间的小鼠进行长期研究，并在入选的小鼠中随机选择 5只处死，留取肾组织等标本备用。在第 7、14、28天时间
本文编号：3410894
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