SPAG9促进前列腺癌增殖和侵袭转移的实验研究

发布时间：2017-05-09 21:17

  本文关键词：SPAG9促进前列腺癌增殖和侵袭转移的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:前列腺癌是常见的泌尿系恶性肿瘤,在欧美发达国家发病率居第1位,死亡率居第2位;在我国,虽发病率低于西方等国家,但近年来随着生活水平及环境变化,发病率逐渐升高。前列腺癌目前的治疗主要为多模式综合治疗,其中包括手术切除、放疗、内分泌治疗等,但是于雄激素抵抗,手术及放疗对于晚期前列腺癌患者疗效不显著。前列腺癌极易复发、侵袭和转移,因此积极寻求前列腺癌相关肿瘤标志物成为前列腺癌早期检测、靶向治疗和预防复发的关键。精子相关抗原9(SPAG9),是癌睾丸抗原(CTA)家族成员之一,在睾丸组织中特异性表达。最近研究表明,在肿瘤的增殖、侵袭、转移等生物学行为中,SPAG9参与并起着重要的调节作用。SPAG9主要是作为支架蛋白,能够辅助活化JNK信号通路,从而促进肿瘤的增殖、侵袭及转移,抑制肿瘤凋亡等。JNK信号通路的活化对于肿瘤的促进均有报道。由此推测,在肿瘤中,SPAG9表达上调,可改变原有的基因调节模式,促进肿瘤的增殖、侵袭及转移等。本研究主要探讨SPAG9对前列腺癌增殖、侵袭、转移等生物学行为的影响。方法1、采用免疫组织化学方法检测人前列腺癌临床标本SPAG9表达水平,并分析其与前列腺癌患者年龄、GS评分、肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移、血PSA值等病理学参数的相关性。2、采用Western blot技术检测前列腺癌细胞中SPAG9表达水平,选择高表达细胞系进行干扰,低表达细胞系进行过表达;3、构建SPAG9过表达质粒及干扰质粒,PC3过表达及DU145干扰后,采用q RT-PCR和Western blot验证转染后细胞SPAG9的表达变化;4、CCK-8检测SPAG9对前列腺癌细胞增殖的影响;5、流式细胞术以及Western blot技术检测SPAG9对前列腺癌细胞周期的影响;6、Transwell实验检测转染SPAG9对前列腺癌细胞体外迁移能力的影响;采用划痕实验观察SPAG9对前列腺癌细胞体外迁移能力的影响;7、采用裸鼠成瘤实验体内验证SPAG9对前列腺癌细胞增殖的影响;8、采用Western blot技术检测SPAG9对MAPK信号通路中ERK、JNK以及P38蛋白的变化。结果1、免疫组化实验结果表明,在人前列腺癌标本中,癌组织SPAG9高表达,相对于癌旁组织低表达;统计学分析发现,SPAG9的表达水平与临床GS评分、前列腺癌分期显著相关(P0.05);2、蛋白水平证实,PC3细胞中SPAG9表达最低,相反,在DU145细胞中表达最高;3、在PC3细胞中,真核表达SPAG9后,其RNA和蛋白均上调,证实真核质粒构建成功;相反,在DU145细胞中干扰SPAG9后,其RNA、蛋白均下调,说明干扰质粒筛选成功;4、CCK-8法实验说明,SPAG9促进前列腺癌细胞的增殖;5、过表达SPAG9后,加快PC3的细胞周期,相反,干扰SPAG9后,DU145细胞周期明显被阻滞;蛋白水平证实,其周期蛋白CDK2及Cyclin D表达增加。6、Transwell迁移实验说明,PC3细胞过表达SPAG9后,穿膜能力明显高于对照组;DU145细胞干扰SPAG9后,穿膜能力低于对照组;划痕实验同样说明,PC3细胞过表达SPAG9后,细胞迁移能力高于对照组;7、裸鼠体内成瘤实验说明,干扰SPAG9后,肿瘤的增殖能力低于对照组;8、在PC3细胞中,过表达SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表达均上调,相反,DU145干扰SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表达均下调。说明,SPAG9活化了JNK、ERK及P38信号通路。结论1、SPAG9在前列腺癌组织中高表达,可能作为早期诊断及预后的指标;2、SPAG9促进前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为;3、SPAG9可能通过ERK、JNK及P38信号通路发挥作用。
【关键词】：SPAG9 前列腺癌 增殖 细胞周期 侵袭转移
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 SPAG9与前列腺癌密切相关12-18
• 2.1 实验材料及仪器12-14
• 2.2 结果14-16
• 2.3 讨论16-17
• 2.4 结论17-18
• 第三章 SPAG9促进前列腺癌增殖及侵袭转移的功能学实验研究18-35
• 3.1 实验材料与方法18-21
• 3.2 实验方法21-28
• 3.3 实验结果28-33
• 3.4 讨论33-34
• 3.5 结论34-35
• 第四章 SPAG9促进前腺癌增殖及侵袭转移的分子机制研究35-38
• 4.1 主要实验材料35
• 4.2 实验方法35
• 4.3 实验结果35-36
• 4.4 讨论36-37
• 4.5 结论37-38
• 全文总结38-39
• 参考文献39-42
• 文献综述 JNK信号通路对肿瘤转移的研究进展42-52
• 参考文献47-52
• 硕士在读期间以第一作者发表的论文情况52-53
• 致谢53

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 孙涛;JIP3和JIP1分别调节神经元轴突生长和TrkB顺轴突转运的研究[D];山东大学;2013年

2 黄鑫;小鼠卵母细胞减数分裂细胞极性建立、纺锤体组装和染色体排列的研究[D];厦门大学;2014年

3 李凯;促红细胞生成素对大鼠臂丛神经根性撕脱伤后脊髓神经元保护的作用及其分子机制研究[D];吉林大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 何小琴;Axin1在小鼠卵母细胞成熟中的作用[D];厦门大学;2014年

2 陈鑫;缺氧微环境下微管相关蛋白4对人表皮细胞迁移能力影响及机制研究[D];第三军医大学;2014年

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本文编号：353346