USP22 aiRNA通过Mdm2-p53通路抑制膀胱癌耐药细胞株T24/MMC的增殖

发布时间：2023-02-01 21:17

　　目的研究沉默泛素特异肽酶22（USP22）基因对膀胱癌T24丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）耐药细胞株（T24/MMC）生长活性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度的MMC（20、40、80、160、320μg/mL）对T24和T24/MMC细胞生长活性的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法检测人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1细胞株、T24和T24/MMC细胞中USP22mRNA和蛋白的表达水平。采用非对称性小RNA（aiRNA）干扰技术沉默USP22,MTT法和吖啶橙/溴化乙啶（AO/EB）双重染色法分别检测沉默USP22后MMC对T24细胞、T24/MMC细胞生长活性和凋亡的影响。实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p53和Mdm2mRNA和蛋白的表达水平。结果采用不同浓度的MMC（20、40、80、160、320μg/mL）处理细胞24h后,T24细胞的生长活性分别为82.4%、68.7%、44.2%、25.4%和4.7%,与未经MMC处理组比较差异均具有统计学意义（均P＜0.05）。然而,0~160μg/... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 细胞培养及转染
    1.3 USP22aiRNA设计及合成
    1.4 MTT法检测细胞生长活性
    1.5 吖啶橙和嗅乙啶(AO/EB)双染色检测细胞凋亡
    1.6 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA的表达水平
    1.7 Western blot法检测目的基因蛋白的表达水平
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 不同浓度的MMC对T24、T24/MMC细胞生长活性的影响
    2.2 USP22aiRNA对USP22基因表达水平的影响
    2.3 沉默USP22对MMC抑制T24和T24/MMC细胞生长活性的影响
    2.4 USP22aiRNA对p53和Mdm2mRNA和蛋白表达的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]化疗后残存乳腺癌组织乳腺癌耐药蛋白和P-糖蛋白的表达及其与上皮间质转化的相关性[J]. 屈洪波,方力,段丽丽,龙孝斌.  中华病理学杂志. 2014 (04)
[2]非对称性小RNA干扰技术介导的USP22基因沉默的研究[J]. 吕磊,杨军,王智宇,蒋国松,肖行远.  中华实验外科杂志. 2010 (10)
[3]膀胱移行细胞癌中候选肿瘤干细胞标记物USP22mRNA水平定量分析及其与肿瘤分级的关系[J]. 骆杨,曾甫清,顾朝辉,汪良,王智宇,蒋国松,肖行远.  临床泌尿外科杂志. 2009(02)
[4]DNA拓扑异构酶在卵巢癌细胞拓扑替康耐药中的作用[J]. 贾平,卢运萍,马丁.  华中科技大学学报(医学版). 2008(01)



本文编号：3734460