白花丹素通过PI3K/AKT、MCM5抑制肾细胞癌增殖和侵袭转移的分子机制研究

发布时间：2023-02-09 18:42

　　肾细胞癌(RCC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,约占恶性肿瘤的2-3%。由于缺乏典型的临床症状和早期肾癌的筛查标志,20-30%的肾癌在诊断时就已经发生转移,导致肾癌的预后不良。转移性肾癌对现有的治疗方式(放疗、化疗、IFN免疫治疗等)不敏感,且大部分患者在靶向治疗6-15月后对靶向治疗药物产生耐药,导致肾癌患者的5年生存率≦10%。因此,探索一新的肾细胞癌诊断、治疗方案已成为临床上亟待解决的问题。白花丹素(Plumbagin,PLB)是从植物白花丹根部提取的一种黄色结晶状萘醌类化合物。目前经体内、外实验已证实PLB具有抗过敏、神经保护、抗肿瘤、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗细菌与真菌等多种药理学活性。此外,PLB对乳腺癌、肝细胞癌、前列腺癌等肿瘤的增殖、侵袭和转移均具有较强的抑制作用。PLB可通过多个分子靶点或信号通路(CDK1/CDC2、Cyclin B1、Cyclin D1、NF-KB,P53、P21、PI3K/AKT/m TOR、Ras、STAT3/PLK1/AKT和Wnt等)促进肿瘤细胞的凋亡、自噬以及细胞周期阻滞,同时也可抑制肿瘤新生血管的形成、侵袭和转移。迄今为止,PLB对肾...

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
前言
第一部分：Plumbagin通过PI3K/AKT抑制肾细胞癌的增殖和侵袭转移
    前言
    材料与方法
        1 材料
            1.1 细胞株
            1.2 药物及化合物
            1.3 主要试剂
            1.4 主要仪器及设备
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 MTT法检测PLB对786-0、769p细胞增殖的影响
            2.3 平板克隆检测PLB对786-0、769p细胞增殖的影响
            2.4 流式细胞仪检测PLB786-0、769p凋亡的影响
            2.5 划痕实验检测PLB对786-0、769p迁移的影响
            2.6 Transwell检测PLB对786-0、769p侵袭的影响
            2.7 Western blot检测PLB对786-0、769P细胞中PI3K/AKT等蛋白的影响
            2.8 裸鼠皮下成瘤
            2.9 数据统计分析
    结果
        1 PLB对肾癌细胞786-0、769p增殖的影响
            1.1 MTT实验结果
            1.2 平板克隆实验结果
        2 PLB对肾癌细胞786-0、769p凋亡的影响
            2.1 流式细胞仪检测结果
            2.2 Western blot检测结果
        3 PLB对肾癌细胞786-0、769p侵袭、转移的影响
            3.1 划痕实验结果
            3.2 Transwell实验结果
            3.3 Western blot检测结果
        4 PLB对人786-0、769p细胞中PI3K/AKT信号通路的影响
            4.1 PLB对 PI3K/AKT相关蛋白的影响
            4.2 PLB和 PI3K/AKT激动剂对786-0、769p细胞增殖的影响
        5 PLB对裸鼠皮下肿瘤生长的影响
    讨论
    小结
第二部分：MCM5 促进肾细胞癌增殖并与肿瘤的进展、预后密切相关
    前言
    材料与方法
        1 材料
            1.1 细胞株
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器及设备
        2 实验方法
            2.1 临床肾细胞癌临床标本的收集
            2.2 免疫组化(IHC)
            2.3 Western blot
            2.4 细胞培养
            2.5 细胞转染
            2.6 MTT检测细胞增殖
            2.7 平板克隆实验
            2.8 RT-PCR
            2.9 裸鼠皮下成瘤实验
            2.10 生物信息学分析
            2.11 统计分析
    结果
        1 MCMs在肾细胞癌组织及肾癌细胞系中的差异表达
        2 MCM5 与肾癌的临床病理特点密切相关
        3 MCM5 可促进肾癌的增殖
    讨论
    小结
第三部分：Plumbagin通过MCM5 抑制肾细胞癌的发生、发展
    前言
    材料与方法
        1 材料
            1.1 细胞株
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器及设备
        2 实验方法
            2.1 实验的分组
            2.2 细胞培养
            2.3 慢病毒转染
            2.4 Western blot
            2.5 MTT检测肾癌细胞增殖
            2.6 统计分析
    结果
        1 PLB可显著下调肾癌细胞MCM5 的表达
        2 PLB可通过MCM5 抑制肾癌细胞的增殖。
    讨论
    小结
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3739053