下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌(I-10)细胞凋亡

发布时间：2023-04-05 13:01

　　目的探讨Pannexin2(Panx-2)蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌(I-10)细胞凋亡的影响。方法免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;以睾丸癌I-10细胞株为研究对象,实验分为转染试剂对照组(mork组)、阴性对照质粒组(NC组)、干扰Panx-2组(shRNA1质粒组和shRNA2质粒组),采用免疫印迹法验证Panx-2的表达;在转染细胞中添加16μmol/L的顺铂诱导细胞死亡,通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率,集落克隆法检测细胞的集落形成能力;在顺铂(16μmol/L)处理8 h后,采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡;在顺铂(16μmol/L)作用24 h后,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果与I-10细胞和Tcam-2细胞相比,I-10/DDP细胞(P<0.001)和Tcam-2/DDP细胞(P<0.01)中Panx-2的表达显著增加;干扰Panx-2基因后,免疫印迹结果显示,与NC组相比,shRNA1和shRNA2组中P...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 细胞株与细胞培养
    1.2 主要试剂
    1.3 I-10细胞稳转株的建立
    1.4 MTT法检测细胞存活率
    1.5 集落克隆法检测细胞集落形成能力
    1.6 FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率
    1.7 免疫印迹法检测Panx-2,caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白表达
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 Panx-2蛋白在I-10和I-10/DDP细胞中及Tcam-2和Tcam-2/DDP细胞中的表达
    2.2 在睾丸癌I-10细胞中，干扰Panx-2对细胞通道功能的影响
    2.3 干扰Panx-2表达水平对顺铂作用下睾丸癌I-10细胞存活率的影响
    2.4 Panx-2表达水平对顺铂作用下睾丸癌I-10细胞集落形成能力的影响
    2.5 干扰Panx-2表达水平对顺铂诱导睾丸癌I-10细胞凋亡的影响
    2.6 干扰Panx-2表达水平对顺铂诱导睾丸癌I-10细胞凋亡相关蛋白的影响
3 讨论



本文编号：3783460