TMEM67在隐性多囊肾发生发展中的相关分子机制的研究

发布时间：2024-04-07 04:25

　　多囊肾病(polycystic kidney disease,PKD)是指双侧肾脏发生多个囊肿且进行性长大而导致肾脏结构和功能损害的一种单基因遗传性疾病。根据遗传方式的不同多囊肾可以分为两种：常染色体显性遗传性多囊肾病和常染色体隐性遗传性多囊肾病。在北美大约有500,000受累ADPKD的发病率为1/500-1000,ARPKD的发病率为1/40000。B6C3Fe ala-bpck是一种常染色体隐性遗传性多囊肾(ARPKD)的动物模型。缺失的TMEM67基因与人类的MKS3以及Wistar大鼠多囊肾模型具有同源性。 目的： 在确定此模型作为ARPKD研究的可行性后,构建含目的基因TMEM67全长的载体pFlag-CMV-TMEM67.将其转染到HEK293细胞中,使TMEM67过表达,检测HEK293细胞中蛋白的表达,以分析TMEM67在ARPKD中可能参与的信号通路。同时应用基因表达谱芯片筛选与正常小鼠相比,突变体小鼠差异表达的基因,初步探讨TMEM67引起的ARPKD的机制。 方法： 1设计引物,取小鼠尾尖,进行PCR,鉴定小鼠基因型后,取不同时期WT(野生型)和MUT(突变体)...

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、常染色体隐性遗传性多囊肾小鼠模型的鉴定
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 主要试剂
    1.2 结果
        1.2.1 野生型小鼠PCR结果测序
        1.2.2 常染色体隐性遗传性多囊肾小鼠模型的鉴定
    1.3 讨论
二、pFlag-CMV-TMEM67载体的构建
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂及配制
        2.1.4 实验方法和步骤
    2.2 结果
        2.2.1 总RNA的提取
        2.2.2 PCR cDNA第一条链的合成
        2.2.3 TMEM67全长的cDNA的克隆
        2.2.4 PCR纯化试剂盒纯化cDNA的PCR产物
        2.2.5 酶切cDNA得到TMEM67全长DNA片段
        2.2.6 酶切质粒PFlag-CMV-ErbB4,得到空载体
        2.2.7 将TMEM67FL连接到空载体pFlag-CMV
        2.2.8 将TMEM67FL-pFlag-CMV转化至感受态细胞中
        2.2.9 挑40个单菌落
        2.2.10 酶切40管质粒
        2.2.11 选取其中4个质粒做转化
        2.2.12 挑单菌落
        2.2.13 粗提质粒
        2.2.14 双酶切并测序
    2.3 讨论
三、TMEM67蛋白在信号通路中研究
    3.1 对象和方法
        3.1.1 细胞系
        3.1.2 主要仪器设备
        3.1.3 实验试剂及配制
        3.1.4 实验方法和步骤
    3.2 实验结果
    3.3 讨论
四、组织芯片筛查常染色体隐性多囊肾的差异基因
    4.1 对象和方法
        4.1.1 组织来源
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 实验耗材
        4.1.5 实验方法和步骤
        4.1.6 Real time PCR检测Affymetrix 430 2.0数据的准确性
    4.2 实验结果
    4.3 讨论
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 多囊肾病的研究进展
    综述参考文献
致谢



本文编号：3947672