前列腺毛细血管内皮及腺上皮细胞的屏障功能研究

发布时间：2017-05-26 00:05

  本文关键词：前列腺毛细血管内皮及腺上皮细胞的屏障功能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：一、背景慢性前列腺炎是泌尿外科的常见病,多发病,有研究显示35~50岁的男性一生中某个时候都会受到前列腺综合征的影响。但是目前临床上,药物治疗前列腺炎的效果很差,并且慢性前列腺炎的症状易反复出现,对患者的心理生理造成巨大的损害。目前慢性前列腺炎的发病机理及确切病因还未完全阐明。但是在临床上前列腺液中一些抗菌药物的浓度低于血浆,并且对于某些类型的慢性前列腺炎患者来讲,其前列腺间质存在明显的炎症而前列腺液中不出现白细胞的情况。因此一些学者通过研究后提出,在人体前列腺组织与血液循环之间可能存在一种特殊的屏障机制。目前的研究也认为,药物在前列腺组织的浓度低于血浆的原因,可能是因为血前列腺屏障的存在。因此对于血前列腺屏障的研究对前列腺疾病的治疗及其发病机制的研究具有非常重要的意义。对于机体已经证实的血脑屏障来讲,血脑屏障的选择通透特性主要由毛细血管内皮细胞维持。中枢神经系统在形成的过程中,毛细血管内皮细胞通过通过自身的成熟并与周围组织形成特殊的结构从而形成血脑屏障,毛细血管内皮细胞的生物化学特性决定血脑屏障的渗透特性,并且这种渗透性也会随着这些血管直径的增加而增加。同样对于血眼屏障与血迷路屏障有研究指出毛细血管内皮细胞不存在窗孔,为连续性内皮,同时被紧密连接蛋白联合,是这些屏障结构的主要组成。关于前列腺毛细血管内皮细胞在血前列腺屏障中的作用,有研究发现前列腺微血管内皮细胞也为连续性内皮,同时跨细胞途径的吞饮囊泡较少,在结构功能方面与血脑屏障,血睾屏障及血附睾屏障相似,提示前列腺毛细血管内皮细胞可能参与了血前列腺屏障的组成。对于前列腺腺上皮细胞,有研究发现,屏障抗原EBA,作为血脑屏障的标志,在雄性动物的生殖系统,存在于血睾屏障、血附睾屏障内。而且经研究发现EBA在前列腺上皮细胞同样表达活跃,同样马文强等的研究也显示前列腺上皮也连续性表达屏障抗原EBA。生物体的基因是有限的,前列腺腺上皮细胞胞浆连续性表达EBA抗原,从分子水平提示前列腺腺上皮细胞可能在血前列腺屏障的选择通透性方面发挥重要的作用。二、目的采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外培养大鼠前列腺腺上皮细胞株,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞的屏障功能,并建立大鼠前列腺毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞的共培养模型,建立血前列腺屏障的体外模型,为以后血前列腺屏障的研究及前列腺疾病的治疗提供方法。三、方法1.采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,采用光镜电镜进行形态学鉴定,并用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴定。2.体外培养大鼠前列腺上皮细胞株,并建立前列腺毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞的共培养模型。免疫组化观察毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,并采用光镜电镜观察毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞的结构。3.采用跨膜电阻测量仪检测毛细血管内皮细胞,腺上皮细胞及共培养模型的跨膜电阻,用酚红渗漏实验检测三种模型的通透性,并以大鼠脑毛细血管内皮细胞及肺毛细血管内皮细胞做为阳性及阴性对照。四、结果1.成功分离了大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,前列腺毛细血管内皮细胞在体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,呈铺路石样生长。免疫荧光结果显示,第Ⅷ因子相关抗原表达于分离培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞胞浆,提示分离的细胞为毛细血管内皮细胞;2.免疫组化结果显示,相邻的毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞之间表达紧密连接蛋白claudin-1;电镜结果显示紧密连接存在于相邻的毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞之间。3.成功建立了大鼠前列腺毛细血管内皮细胞及腺上皮细胞的共培养模型,体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,腺上皮细胞,共培养模型,脑毛细血管内皮细胞及肺毛细血管内皮细胞的跨膜电阻峰值可以达到142.2±3.1?/cm2,201.3±3.5?/cm2,223±2.3?/cm2,248.20±6.2?/cm2,43.3±3.5?/cm2左右,酚红渗漏实验显示,前列腺毛细血管,腺上皮,共培养模型,脑毛细血管内皮细胞随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低,而大鼠肺毛细血管内皮细胞基底侧酚红浓度随跨膜电阻的变化趋势不明显。五、结论1.根据细胞的生长特性选择法可以成功分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,该方法具有操作简单,无机械性及化学性损伤等优点。2.大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,腺上皮细胞具有与脑毛细血管内皮细胞等屏障内皮相似的结构功能。体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮及腺上皮细胞具有一定程度的屏障特性,提示前列腺毛细血管内皮及腺上皮细胞可能参与了血前列腺屏障的组成。3.共培养模型更接近生理状态,通透性较低可以做为血前列腺屏障研究的体外模型。
【关键词】：毛细血管内皮细胞 腺上皮细胞 血前列腺屏障 跨膜电阻
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R697.33
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 前列腺毛细血管内皮细胞的分离培养及鉴定13-21
• 2.1 材料和方法13-16
• 2.2 结果16-19
• 2.3 讨论19-20
• 2.4 小结20-21
• 第三章 大鼠前列腺毛细血管内皮及腺上皮细胞的屏障功能研究21-30
• 3.1 材料和方法21-24
• 3.2 结果24-27
• 3.3 讨论27-29
• 3.4 小结29-30
• 全文总结30-31
• 参考文献31-34
• 文献综述 血前列腺屏障的研究进展34-44
• 参考文献39-44
• 第一作者在读期间发表论文情况44-45
• 致谢45

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