体内外研究慢病毒介导的Pygo2shRNA抑制肾癌OS-RC-2细胞增殖及侵袭性

发布时间：2024-04-26 02:49

　　目的体内实验研究Pygo2在肾癌OS-RC-2细胞增值、侵袭性发生的作用，体外实验进一步验证Pygo2在肿瘤生长的作用以及与肿瘤侵袭、转移的关系。 方法通过慢病毒介导三质粒重组，建立Pygo2沉默组,Pygo2过表达组以及相应的对照组。利用慢病毒感染肾癌OS-RC-2细胞，并用WesternBlot检测感染Pygo2改变的效率。通过MTT和克隆形成实验，检测各组细胞的增值能力。Transwell实验研究Pygo2在侵袭方面的作用。通过筛选细胞建立稳定细胞系，并将4种肾癌OS-RC-2细胞植于裸鼠腋下，连续观察裸鼠皮下肿瘤及肺部转移瘤的生长情况。HE染色观察肺部转移瘤情况。免疫组化实验测定各组肿瘤组织的侵袭性蛋白（MMP-9、MMP-7和VEGF）。 结果Pygo2的下调，肾癌OS-RC-2细胞增值能力和侵袭性明显降低。成功筛选出Pygo2shRNA（Pygo2的抑制组）、Pygo2scrRNA(空载体）、GFP（对照组）和Pygo2OE（Pygo2的过表达）的稳定感染细胞株，并成功构建裸鼠荷瘤模型，Pygo2shRNA组的肿瘤生长明显受到抑制，Pygo2OE组肺部有转移瘤。免疫组化实验...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3-1各组Pygo2蛋白质表达情况

图3-1各组Pygo2蛋白质表达情况gure3-1WecanseethatPygo2proteinsuppressiongroupoup,wh....

图3-2抑制Pygo2对OS-RC-2增值的影响

图3-1各组Pygo2蛋白质表达情况Figure3-1WecanseethatPygo2proteinsuppressiongroupislo....

图3-3抑制Pygo2对细胞集落形成的影响

测结果发现：与Pygo2OE、GFP及Pygo2scrRNA相比较,Pygo2显受到抑制。（P<0.01）隆形成（colonyformati....

图3-4抑制Pygo2对细胞侵袭性的影响

如果抑制Pyo2的表达，细胞侵袭能力明显减弱。说明Py应的靶基因激活，增加细胞外基质的分解，促进肿瘤细胞的扩散结果发现：穿透Matrigel胶....

本文编号：3964595