补体C3在糜酶促进肾间质纤维化中的作用

发布时间：2024-05-09 19:36

　　目的:观察补体C3在糜酶促进肾间质纤维化中的作用。方法:第一部分:C3基因敲除对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠的影响。建立UUO小鼠模型,将12只野生型C57BL/6小鼠随机分为WTcontrol组和WTuuo组,将12只C3基因敲除(C3 gene knockout,C3KO)的C57BL/6小鼠随机分为C3KOcontrol组和C3KOuuo组。第二部分:糜蛋白酶抑制剂chymostatin对UUO小鼠的影响。将18只野生型C57BL/6小鼠随机分为WTcontrol组、WTuuo组和WTuuo+chymostatin组。其中WTuuo+chymostatin组在术后第1天至第14天腹腔注射10mg/Kg的chymostatin。所有小鼠均在第14天处死,取术侧肾组织,用Masson染色法观察肾间质纤维化程度;免疫组化对C3、胰蛋白酶(tryptase)、血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)、转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白...

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【学位级别】：硕士

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前言
材料
    1.1 实验对象
    1.2 主要试剂
    1.3 主要实验仪器及耗材
    1.4 各种缓冲液配制
方法
    2.1 动物培养
    2.2 C3 鼠尾基因组的提取及小鼠基因组的鉴定
    2.3 UUO小鼠模型的建立及组织获取
    2.4 HE染色与肾小管-间质损伤评估
    2.5 肾脏纤维化的半定量评估：Masson三色染色法
    2.6 肾组织相关指标免疫荧光、免疫组化检测
    2.7 肾组织 chymase 活性测定
    2.8 肾组织 renin 基因表达 Q-PCR 测量
    2.9 肾组织目的蛋白western blot检测
    2.10 肾组织目的蛋白El ISA检测
结果
    第一部分：C3缺陷小鼠对UUO小鼠的影响
        1. 肾脏病理改变
            1.1 肾小管-间质损伤
            1.2 肾小管-间质损伤指数评分
            1.3 胶原纤维沉积
        2. 肾组织C3/C3a表达
            2.1 肾组织C3表达
            2.2 肾组织C3a表达
        3. 肾组织MC浸润结果
            3.1 肾组织tryptase、chymase阳性细胞检测
            3.2 肾组织chymase蛋白表达
        4. 肾组织RAS激活
            4.1 肾组织renin表达
                4.1.1 肾组织renin mRNA表达
                4.1.2 肾组织renin蛋白表达
            4.2 肾组织Ang II表达
        5．肾组织TGF-β1 表达
        6．肾组织MMP9表达
    第二部分：糜酶抑制剂对UUO小鼠的影响
        7. 肾脏病理改变
            7.1 肾小管-间质损伤
            7.2 肾小管-间质损伤指数评分
            7.3 胶原纤维沉积
        8. 肾组织chymase活性测试
        9. 肾组织Ang II表达
        10．肾组织TGF-β1 表达
        11．肾组织MMP9表达
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3968520