诱导多能干细胞向肾脏前体细胞定向分化及修复肾损伤的作用与机制

发布时间：2024-05-14 04:04

　　研究背景及目的： 诱导多能干细胞（Induced pluripotent stem cells，iPS）是目前干细胞与组织再生研究领域的一项重大突破，因为其解决了胚胎干细胞来源有限和伦理学障碍的难题，在医学领域展示了广阔的应用前景。肾脏疾病发展到终末期都需要肾移植等替代治疗，干细胞移植是治疗肾脏疾病的理想治疗方式，但有关iPS细胞在肾脏再生领域的研究较少。本文旨在建立iPS细胞向肾脏前体细胞定向分化的体外诱导培养技术体系，观察iPS细胞来源的肾脏前体细胞在动物模型体内肾脏组织中的存活及分化能力，以及对大鼠肾缺血再灌注损伤的修复作用，探讨其作用机制，为iPS细胞在肾脏疾病方面的再生治疗提供实验依据。 方法： 1体外诱导iPS细胞向肾脏前体细胞分化 1) iPS细胞的培养：从胎鼠获得小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF），传至第3代，用γ射线辐照处理后冻存。MEF作为饲养层细胞，iPS细胞接种在饲养层细胞上培养，正常传代、扩增。 2)拟胚体（embryonic body，EB）的培养：iPS细胞用去除白血病抑制因子（leukemiainhibi...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1PCR循环示意图

上游引物（10μM）0.8μl0.4μM下游引物（10μM）0.8μl0.4μM样品溶液2μlTotalvolume20μl每个指标在定量时均进行三复孔重复，进一步保证结果的准确。2)步骤1配置的PCR反应溶液置于RealtimePCR仪上进行....

图1-2iPS细胞培养及诱导过程中的细胞形态学观察（相差显微镜下观察：AiPS细胞在饲养层细胞上生长；B悬浮培养第二天的EB；CEB贴壁诱导培养第一天；DEB诱导培养第三天；EREGM诱导培养第一天；FREGM诱导培养第五天

29图1-2iPS细胞培养及诱导过程中的细胞形态学观察显微镜下观察：AiPS细胞在饲养层细胞上生长；B悬浮培养第二天的E培养第一天；DEB诱导培养第三天；EREGM诱导培养第一天；FREG。×100）Cellmorphologicalobservatio....

图1-73组诱导培养的细胞中肾脏发育调控因子的转录水平变化

1-73组诱导培养的细胞中肾脏发育调控因子的转录水平变化igure1-7Transcriptionallevelchangesofregulatoryfactorsinvolvedinkidneydevelopmentinnductioncultu....

图1-8流式细胞技术检测3组中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24阳性细胞的比例Figure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cadherin+andCD24+cellsamongthreeGroups.讨论

321-8流式细胞技术检测3组中Pax2、Bry、WT1、E-cadherin、CD24阳性细胞的比例igure1-8FlowcytometrytechnologydetectstheproportionofPax2+、Bry+、WT1+、E-cad....

本文编号：3973164