腺病毒介导的泛素连接酶RNF8敲低能增强膀胱癌对放疗的敏感性

发布时间：2025-01-09 03:30

　　目的:膀胱癌是泌尿系统癌症中具有第二位致死性的疾病,也是世界上在男性中第六位常见发病的恶性肿瘤。然而,在膀胱癌的临床治疗中存在一些不容乐观的现状,因此需要人们去探索、发展治疗的新策略。其中腺病毒介导的基因治疗在临床上的应用具有显著提高病人疗效的潜在价值,而且该方法还具备在治疗中保留膀胱的可能性。RNF8是一种泛素连接酶,它能促进DNA的损伤修复。RNF8在膀胱癌细胞中高表达,且这种高表达能由腺病毒介导的sh RNA处理而逆转。因此,本实验的目的是探索经由腺病毒介导的sh RNA敲低RNF8对膀胱癌的放疗效果的独特的靶向作用。方法:培养并收获处于对数生长期的三种膀胱癌细胞系T24、BIU87和5637用于免疫印迹实验以比较RNF8在膀胱癌细胞中的表达量,对取自膀胱癌病人的癌组织也通过免疫印迹实验比较其RNF8的表达情况。随后,应用免疫荧光染色实验来探测膀胱癌细胞中内源性RNF8的自发表达。接下来将膀胱癌细胞系暴露于2 Gy的X射线辐射中,通过免疫荧光试验来检测由DNA损伤引起的RNF8和γ-H2AX聚集的电离辐射灶(IRIF)。在膀胱癌细胞系中运用腺病毒介导的sh RNA来敲低RNF8的表...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 膀胱癌的危害和其治疗现状
    1.2 通过腺病毒靶向治疗膀胱癌
    1.3 DNA损伤修复与肿瘤对基因毒性药剂的抵抗
    1.4 组蛋白泛素化修饰和DNA损伤修复中的作用
    1.5 RNF8在DNA损伤修复中的作用
第二章 材料与方法
    2.1 细胞系和细胞培养
    2.2 蛋白免疫印迹（Western blotting）
    2.3 通过腺病毒介导的RNA沉默敲低RNF8
    2.4 克隆形成实验
    2.5 凋亡的免疫细胞化学分析
    2.6 吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)复染色法检测凋亡
    2.7 免疫荧光试验检测细胞核内焦点形成
    2.8 BALB/c裸鼠肿瘤种植
    2.9 肿瘤组织的H&E染色
    2.10 统计学方法
第三章 结果及讨论
    3.1 结果及分析
        3.1.1 RNF8在膀胱癌细胞中高表达并参与DNA损伤应答
        3.1.2 RNF8敲低会增强膀胱癌细胞对放疗的敏感性
        3.1.3 RNF8敲低能增加射线引发的膀胱癌细胞凋亡
        3.1.4 RNF8敲低会干扰膀胱癌细胞中DNA损伤修复通路运行
        3.1.5 RNF8敲低会阻碍 53BP1、BRCA1和RAP80在DNA损伤位点募集
        3.1.6 RNF8敲低能在体内增强膀胱癌肿瘤放疗的效果
    3.2 讨论
        3.2.1 基因治疗在癌症治疗中的作用
        3.2.2 溶瘤病毒与腺病毒载体
        3.2.3 实验结果的相互映证
        3.2.4 RNF8敲低对放疗增敏作用的可能的端粒机制
第四章 结论
第五章 本文局限性
参考文献
在学期间的研究成果
英文缩写表
致谢



本文编号：4025079