应用重组酶聚合酶扩增检测法快速分群解脲支原体的探讨

发布时间：2025-01-09 04:08

　　 目的探讨应用重组酶聚合酶扩增(RPA)技术对解脲支原体(UU)快速分群的检测方法,并与PCR-反向点杂交法进行比较,建立UU快速分群的床旁检测(POCT)方法。方法采用UU标准菌株、收集的临床标本及阴性质控菌株,经引物设计和菌株、临床标本DNA提取,对UU标准菌株、收集临床标本及阴性质控菌株进行RPA法、PCR-反向点杂交法分群检测,通过两种方法的结果比较,评价RPA法检测UU快速分群试验的可行性。结果 RPA法成功将UU标准菌株分群;113例临床标本中检测发现39例UU感染,其中12例UU为生物Ⅰ群,27例为生物Ⅱ群;阴性质控菌株未扩增;以上UU标准菌株、临床标本、阴性质控菌株经过PCR-反向点杂交法分群,结果与RPA法一致,成功建立UU RPA分群法。结论 RPA法与PCR-反向点杂交法对UU进行分群结果一致,应用RPA法可以简捷、快速、高效、灵敏地完成UU的分群,获得致病型UU的诊断结果。

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【部分图文】：

图1 UU-MH支原体分离鉴别管液体培养48h后结果

在接种培养的24～48h，通过实验观察与记录，发现UU标准菌株ATCC33699和ATCC27815培养基由橙黄色变成红色，结合阴性对照的培养管未发生颜色变化，判断待测的UU标准菌株阳性培养结果，见图1。2.2UUPCR-反向点杂交法分群实验结果

图2 常规PCR-反向点杂交法对UU标准菌株进行分群检测结果

UU分群的扩增产物中生物Ⅰ群为156bp，生物Ⅱ群为150bp，标准菌株、临床标本相应的扩增产物见图3、4；阴性对照菌株（159株）均未见扩增，且与UU常规PCR-反向点杂交法结果一致，见表2。标准菌株ATCC27815和ATCC33699的测序结果和相应菌株的全基因组进行bla....

图3 RPA法检测UU分群生物Ⅰ群、生物Ⅱ群扩增产物电泳图

图2常规PCR-反向点杂交法对UU标准菌株进行分群检测结果图4RPA法检测临床标本中UU生物I型扩增产物电泳图

图4 RPA法检测临床标本中UU生物I型扩增产物电泳图

图3RPA法检测UU分群生物Ⅰ群、生物Ⅱ群扩增产物电泳图3讨论

本文编号：4025125