穿心莲内酯增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体杀伤膀胱癌细胞机制
发布时间：2025-04-15 00:19
研究背景:膀胱癌是发病率最高的人类泌尿系统恶性肿瘤,其中以膀胱移行上皮癌最为常见。目前,对于晚期膀胱肿瘤仍缺乏有效的治疗方法。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),因其可以特异性地杀伤肿瘤细胞而不伤及正常细胞,故被认为是一种有效的抗肿瘤药物。然而,膀胱肿瘤细胞可产生对TRAIL的耐药性。近年来的研究表明,在多种肿瘤细胞系中,穿心莲内酯(Andrographolide)具有增强TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的作用。然而,联合应用TRAIL和穿心莲内酯的治疗方法尚未被应用于治疗膀胱肿瘤,其具体分子机制也有待进一步研究。目的:为证实穿心莲内酯可作为TRAIL的有效增敏剂,可以用来克服人膀胱癌细胞对TRAIL的耐药。进一步研究穿心莲内酯与TRAIL联合应用,增强TRAIL诱导人膀胱癌细胞凋亡能力的分子机制。方法:在生物信息学分析部分,基于TCGA数据库、Oncomine数据库中膀胱上皮癌的mRNA表达数据,分析目的基因在肿瘤和癌旁正常组织中的表达差异。利用基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA),评估预先定义的基因集与特定表型的相关程度。在细胞实验部...
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词
第1章 绪论
1.1 膀胱癌背景知识
1.1.1 膀胱癌概况
1.1.2 膀胱癌治疗方法简介
1.2 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的背景知识
1.2.1 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肿瘤的关系
1.2.2 TRAIL和其相关的受体分子
1.2.3 TRAIL诱导的细胞凋亡信号通路
1.2.4 细胞对于TRAIL的敏感性和抵抗性
1.3 穿心莲内酯的背景知识
1.3.1 穿心莲内酯简介
1.3.2 穿心莲内酯的抗肿瘤活性
1.4 穿心莲内酯与其他药物的协同作用
1.5 结语与前景展望
第2章 实验材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 实验耗材
2.3 实验试剂
2.4 生物信息学分析方法
2.4.1 目的基因mRNA表达差异分析
2.4.2 基因共表达分析部分
2.4.3 GSEA基因集富集分析
2.5 体外细胞实验部分
2.5.1 细胞培养条件
2.5.2 MTS法检测细胞增殖能力
2.5.3 细胞计数法检测细胞增殖能力
2.5.4 MTS法测定药物IC50(半数抑制浓度)值
2.5.5 MTS法检测细胞活力
2.5.6 细胞划痕实验
2.5.7 细胞克隆形成实验
2.5.8 BCA法标定蛋白样品浓度
2.5.9 免疫蛋白印迹实验(Western blot assays)
2.5.10 实时荧光定量PCR实验
2.5.11 流式细胞术检测细胞凋亡率
2.5.12 细胞转染
2.6 统计学检测方法
第3章 实验结果
3.1 生物信息学分析部分
3.1.1 mRNA表达差异分析
3.1.2 单基因的基因集富集分析结果
3.1.3 mRNA共表达表达相关性分析
3.1.4 蛋白相互作用网络预测
3.2 体外细胞实验部分
3.2.1 在多种膀胱癌细胞系中TRAIL的IC50值测定
3.2.2 在多种膀胱癌细胞系中穿心莲内酯的IC50值测定
3.2.3 在多种膀胱癌细胞系中应用各浓度TRAIL对细胞活力的影响
3.2.4 在多种膀胱癌细胞系中应用各浓度穿心莲内酯对细胞活力的影响
3.2.5 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞活力的影响
3.2.6 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对5637细胞和UM-UC3细胞活力的影响
3.2.7 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞增殖能力的影响
3.2.8 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞克隆形成能力的影响
3.2.9 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞迁移能力的影响
3.2.10 应用穿心莲内酯可增强TRAIL诱导的T24细胞凋亡
3.2.11 联合用药诱导T24细胞死亡依赖于半胱天冬酶家族(Caspase family)
3.2.12 穿心莲内酯通过上调死亡受体表达量来增强TRAIL诱导的细胞凋亡
3.2.13 沉默DR4或DR5的基因表达可削弱联合用药对T24细胞的杀伤效果
3.2.14 在T24细胞中穿心莲内酯上调DR4和DR5基因的表达依赖于P53基因
3.2.15 在T24细胞中沉默P53基因的表达可削弱联合用药对细胞活力的抑制
3.2.16 在T24细胞中沉默P53基因可降低联合用药诱导的细胞凋亡比率
3.2.17 在T24细胞中穿心莲内酯通过抑制RelA增强TRAIL诱导的细胞凋亡
3.2.18 抑制NF-κB的活性可增强TRAIL诱导的T24细胞凋亡和细胞活力抑制
3.2.19 抑制NF-κB通路可提高TRAIL诱导的5637、UM-UC3细胞的凋亡比率
3.2.20 联合应用穿心莲内酯可提高TRAIL诱导的5637、UM-UC3细胞的凋亡比率
3.3 结果讨论
第4章 结论
参考文献
作者简介以及攻读博士期间的科研成果
致谢
本文编号：4039774
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词
第1章 绪论
1.1 膀胱癌背景知识
1.1.1 膀胱癌概况
1.1.2 膀胱癌治疗方法简介
1.2 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的背景知识
1.2.1 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肿瘤的关系
1.2.2 TRAIL和其相关的受体分子
1.2.3 TRAIL诱导的细胞凋亡信号通路
1.2.4 细胞对于TRAIL的敏感性和抵抗性
1.3 穿心莲内酯的背景知识
1.3.1 穿心莲内酯简介
1.3.2 穿心莲内酯的抗肿瘤活性
1.4 穿心莲内酯与其他药物的协同作用
1.5 结语与前景展望
第2章 实验材料与方法
2.1 实验仪器
2.2 实验耗材
2.3 实验试剂
2.4 生物信息学分析方法
2.4.1 目的基因mRNA表达差异分析
2.4.2 基因共表达分析部分
2.4.3 GSEA基因集富集分析
2.5 体外细胞实验部分
2.5.1 细胞培养条件
2.5.2 MTS法检测细胞增殖能力
2.5.3 细胞计数法检测细胞增殖能力
2.5.4 MTS法测定药物IC50(半数抑制浓度)值
2.5.5 MTS法检测细胞活力
2.5.6 细胞划痕实验
2.5.7 细胞克隆形成实验
2.5.8 BCA法标定蛋白样品浓度
2.5.9 免疫蛋白印迹实验(Western blot assays)
2.5.10 实时荧光定量PCR实验
2.5.11 流式细胞术检测细胞凋亡率
2.5.12 细胞转染
2.6 统计学检测方法
第3章 实验结果
3.1 生物信息学分析部分
3.1.1 mRNA表达差异分析
3.1.2 单基因的基因集富集分析结果
3.1.3 mRNA共表达表达相关性分析
3.1.4 蛋白相互作用网络预测
3.2 体外细胞实验部分
3.2.1 在多种膀胱癌细胞系中TRAIL的IC50值测定
3.2.2 在多种膀胱癌细胞系中穿心莲内酯的IC50值测定
3.2.3 在多种膀胱癌细胞系中应用各浓度TRAIL对细胞活力的影响
3.2.4 在多种膀胱癌细胞系中应用各浓度穿心莲内酯对细胞活力的影响
3.2.5 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞活力的影响
3.2.6 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对5637细胞和UM-UC3细胞活力的影响
3.2.7 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞增殖能力的影响
3.2.8 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞克隆形成能力的影响
3.2.9 联合应用TRAIL和穿心莲内酯对T24细胞迁移能力的影响
3.2.10 应用穿心莲内酯可增强TRAIL诱导的T24细胞凋亡
3.2.11 联合用药诱导T24细胞死亡依赖于半胱天冬酶家族(Caspase family)
3.2.12 穿心莲内酯通过上调死亡受体表达量来增强TRAIL诱导的细胞凋亡
3.2.13 沉默DR4或DR5的基因表达可削弱联合用药对T24细胞的杀伤效果
3.2.14 在T24细胞中穿心莲内酯上调DR4和DR5基因的表达依赖于P53基因
3.2.15 在T24细胞中沉默P53基因的表达可削弱联合用药对细胞活力的抑制
3.2.16 在T24细胞中沉默P53基因可降低联合用药诱导的细胞凋亡比率
3.2.17 在T24细胞中穿心莲内酯通过抑制RelA增强TRAIL诱导的细胞凋亡
3.2.18 抑制NF-κB的活性可增强TRAIL诱导的T24细胞凋亡和细胞活力抑制
3.2.19 抑制NF-κB通路可提高TRAIL诱导的5637、UM-UC3细胞的凋亡比率
3.2.20 联合应用穿心莲内酯可提高TRAIL诱导的5637、UM-UC3细胞的凋亡比率
3.3 结果讨论
第4章 结论
参考文献
作者简介以及攻读博士期间的科研成果
致谢
本文编号：4039774
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