转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究

发布时间：2017-06-17 08:37

  本文关键词：转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肾细胞癌是泌尿系统的恶性肿瘤之一,发病率约占全部肾癌的70-75%。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB),是细胞内重要的核转录因子。它与靶基因启动子区域的CRE(cAMP response element)序列结合后,激活靶基因的转录活性,从而参与调控细胞周期、增殖和迁移等多种细胞功能。新近研究发现,CREB蛋白水平在部分癌组织和细胞中呈显著性高表达。我们的前期研究也发现,阻断CREB与细胞增殖相关基因的结合能显著性抑制肿瘤细胞的生长,和抗癌药物诱导的肿瘤细胞凋亡。由此可见,CREB极有可能是机体内的一种原癌基因。然而,CREB在肾癌发生和转移的作用及其分子机制尚不清楚。本研究首先检测肾癌和癌旁组织、肾上皮细胞(HK-2)和肾癌细胞系(ACHN、786-O、OS-RC-2)中pCREB和total CREB(tCREB)的表达情况;其次,构建定点突变133位丝氨酸的重组质粒和siRNA转染肾癌细胞系,降低细胞内pCREB水平;第三,体内外实验研究pCREB与肾癌细胞增殖的关系;第四,划痕和transwell实验探讨pCREB对肾癌细胞迁移和侵袭的影响、以及免疫荧光实验检测丝状伪足在肾癌细胞迁移中的作用;最后,western blot、生物信息学和chip实验分析pCREB介导肾癌转移的分子机制。结果发现,pCREB在肾癌组织及肾癌细胞系中的表达显著性高于癌旁组织和HK-2细胞;降低pCREB水平后,肾癌细胞的体外生长和裸鼠成瘤能力显著性被抑制;在降低肾癌细胞迁移和侵袭能力的同时,伴随着MMP-2和MMP-9蛋白表达的减少、以及丝状伪足的消失。进一步研究发现,pCREB通过调控EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Fibronectin)的表达影响肾癌转移。有趣的是,pCREB水平高低并不影响Vimentin的蛋白表达和纤维排列。生物信息学软件预测发现,Fibronectin启动子区域存在CRE序列,而Vimentin的启动子区仅含有CRE-BP结合位点;chip实验证实了pCREB能直接结合Fibronectin基因,而不调控Vimentin基因。由此可见,降低pCREB水平能抑制肾癌的发生和转移。其抑制转移的机制是通过改变细胞骨架微丝纤维的重排和调控上皮间质化相关蛋白的表达。然而,与间质化有关的vimentin不参与此过程。
【关键词】：CREB 细胞骨架 上皮间质化 肾癌发生和转移
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 研究内容和技术路线11-13
• 1.1 研究内容11-12
• 1.2 技术路线12-13
• 2 实验材料和方法13-26
• 2.1 实验材料13-16
• 2.1.1 组织标本13
• 2.1.2 细胞株13
• 2.1.3 裸鼠13
• 2.1.4 主要试剂13-15
• 2.1.5 实验仪器15-16
• 2.2 实验方法16-26
• 2.2.1 细胞培养16
• 2.2.2 慢病毒系统包装实验16-19
• 2.2.3 瞬时转染siRNA19-20
• 2.2.4 细胞增殖实验20
• 2.2.5 裸鼠皮下注射实验20
• 2.2.6 Western blot实验20-22
• 2.2.7 划痕实验22-23
• 2.2.8 Transwell实验23
• 2.2.9 免疫荧光染色实验23
• 2.2.10 Chip实验23-25
• 2.2.11统计分析25-26
• 3 实验结果26-37
• 3.1 在肾癌组织和细胞系中pCREB被显著性上调26
• 3.2 降低pCREB水平抑制肾癌发生26-29
• 3.3 降低pCREB水平抑制肾癌细胞的迁移和侵袭29-33
• 3.4 pCREB水平减少抑制肾癌细胞丝状伪足的形成33
• 3.5 CREB介导的肾癌细胞迁移并不通过Vimentin调控33-37
• 4 讨论37-40
• 5 结论40-41
• 参考文献41-44
• 附录A 综述44-52
• 参考文献49-52
• 在学研究成果52-53
• 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈晓敏;郭俊明;乐东海;夏天;李克强;;上皮 间质转化:肿瘤转移的重要调控机制[J];中国细胞生物学学报;2013年09期

  本文关键词：转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：457802