C-SRC基因对肾癌细胞生物学特性的影响及其临床意义研究

发布时间：2017-06-20 08:01

  本文关键词：C-SRC基因对肾癌细胞生物学特性的影响及其临床意义研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]原癌基因c-Src与肿瘤的发生发展密切相关,本课题组前期发现CXCR4入核与肾癌转移密切相关,其入核后可能与c-Src相互作用促进肿瘤细胞转移,本课题旨在利用基因敲减技术研究慢病毒c-Src shRNA对肾癌细胞的影响及其临床意义,进一步完善CXCL12/CXCR4生物轴信号传导通路的研究,为临床制定肾细胞癌靶向治疗策略提供理论基础。[研究方法]本课题从以下三个方面对研究目的加以验证：1.制备慢病毒介导的c-Src shRNA并利用RT-PCR和Western blot在mRNA、蛋白水平验证基因沉敲减效果；2.体外实验CCK8细胞增殖检测、Transwel、流式细胞技术等验证c-Src基因敲减后肾癌细胞株增殖活性、侵袭迁移、细胞周期、细胞凋亡等指标的变化情况；3.利用免疫组化、组织芯片等技术,检测c-Src基因在肾癌组织中的表达情况,并结合临床指标及预后,探讨C-SRC基因的临床意义。[结果]1、从构建的3条慢病毒c-Src shRNA成功筛选出一条敲减效率达73%的C-SRC shRNA慢病毒,经RT-PCR和Western blot验证能显著抑制A498-EGFP、A498-EGFP-CXCR4细胞中C-SRC基因的mRNA、蛋白表达,同时也抑制了CXCR4基因mRNA、蛋白表达；2、稳转A498-EGFP-SRC shRNA和A498-EGFP-CXCR4-SRC shRNA肾癌细胞株和阴性对照组相比细胞的增殖活性及侵袭迁移能力均下降,细胞周期出现S期阻滞,细胞凋亡差异不明显；3、组织芯片标本中c-src表达量与患者的预后相关,c-src表达不同患者间生存期存在明显差异,c-src表达量高的患者预后更差。[结论]c-Src基因敲减后肾癌细胞的C-SRC基因的mRN A、蛋白表达降低,同时伴有CXCR4基因mRNA、蛋白表达降低,进一步论证了CXCR4入核后可能与c-Src存在相互作用促进肿瘤细胞转移,体外实验表明c-Src基因敲减后肾癌细胞生物学活性降低,且组织芯片中c-Src表达量高的肾癌患者的生存期明显缩短,因此,c-Src基因有望成为肾癌治疗的新靶点。
【关键词】：c-SRC 肾细胞癌 CXCR4 基因敲减 慢病毒
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-15
• 参考文献13-15
• 第一部分 慢病毒载体介导的C-SRC shRNA基因的制备及敲减效果的验证15-41
• 一、材料15-16
• 二、方法16-27
• 三、结果27-38
• 四、讨论38
• 五、结论38-40
• 参考文献40-41
• 第二部分 C-SRC基因敲减后对人肾癌细胞体外生物学行为的影响41-54
• 一、材料41-42
• 二、方法42-46
• 三、结果46-52
• 四、讨论52
• 五、结论52-53
• 参考文献53-54
• 第三部分 C-SRC基因在肾癌组织的表达及与临床指标的关系54-70
• 一、材料54-56
• 二、方法56-57
• 三、结果57-67
• 四、讨论67-68
• 五、结论68-69
• 参考文献69-70
• 文献综述70-80
• 参考文献76-80
• 在读期发表论文和参加科研工作情况说明80-81
• 致谢81-82

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 庞霞;李晟磊;赵志华;赵阿红;张红新;高冬玲;;食管鳞状细胞癌组织中FAK、Paxillin和MMP-9蛋白的表达及临床意义[J];重庆医学;2011年14期

2 赵志华;庞霞;李晟磊;赵阿红;张红新;高冬玲;;食管鳞状细胞癌组织中FAK和paxillin的表达[J];广东医学;2010年08期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 荚德水;肝细胞癌基因组拷贝数畸变区域内相关基因的功能及分子机理研究[D];复旦大学;2012年

2 蔡舟;PEAK1在肝细胞癌组织中的表达及其临床关系研究[D];中南大学;2013年

3 江雪梅;非受体酪氨酸激酶Src在肝癌转移复发中的作用及机制研究[D];复旦大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 何卫华;粘着斑激酶及肝癌缺失基因-1在卵巢上皮性癌组织中的表达及其意义[D];郑州大学;2010年

2 仲广生;乳腺浸润性导管癌中paxillin和caspase-3的表达及临床意义[D];郑州大学;2012年

  本文关键词：C-SRC基因对肾癌细胞生物学特性的影响及其临床意义研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：464915