骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤足细胞mTOR的影响

发布时间：2017-06-27 13:17

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤足细胞mTOR的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨大鼠BMSCs对阿霉素损伤足细胞m TOR的影响。方法:1、利用密度梯度离心法结合贴壁分离法从SD大鼠骨髓中提取BMSCs,经体外传代、扩增至P3,并利用流式细胞仪鉴定其表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90,同时运用成软骨和成脂诱导方法鉴定其功能。2、利用过筛法和IV型胶原酶消化法从SD大鼠肾脏中提取足细胞,经体外培养,并通过免疫荧光法检测其表面特有的蛋白nephrin和podocin对其进行鉴定。3、体外实验,分为:正常组足细胞;阿霉素组足细胞+阿霉素(2ug/ml);干细胞组足细胞+BMSCs(共培养24h)+阿霉素(2ug/ml)。各实验组干预0h、3h、24h后利用Western bolt技术检测各组足细胞骨架相关蛋白nephrin及m TOR信号通路相关蛋白m TOR、p-m TOR、raptor、rictor的表达情况。结果:1、显微镜下观察BMSCs呈梭形、多角形成纤维细胞样形态,大小基本一致。BMSCs在分别加入成软骨和成脂诱导剂下成功诱导出成软骨细胞和脂肪细胞。利用流式细胞仪检测BMSCs表面的抗原标志物提示CD29、CD90呈强阳性,CD34和CD45呈阴性表达。细胞纯度可达98%以上。2、利用过筛法可以成功分离出肾小球,用IV型胶原酶消化后种植在培养瓶中能从肾小球中爬出成鹅卵石样细胞,利用免疫荧光法检测其表面可以表达出足细胞特有的蛋白nephrin和podocin。3、Western bolt结果显示:在0小时和3小时时,正常组、阿霉素组、干细胞组nephrin和rictor的表达无明显差异;在24小时时,干细胞组和阿霉素组的nephrin的表达均比正常组少,但干细胞组比阿霉素组的表达多,同时干细胞组和阿霉素组的rictor的表达均比正常组多,但干细胞组比阿霉素组的表达少。m TOR、p-m TOR、raptor蛋白在0小时时,正常组、阿霉素组、干细胞组的表达无明显差异,但是在3小时、24小时时,干细胞组和阿霉素组的表达均比正常组多,但干细胞组比阿霉素组的表达少,且24小时时的表达量均大于3小时时的表达量。结论:1、利用密度梯度离心法结合贴壁筛选法能成功提取、培养出BMSCs,并且其纯度高、活性高、增殖能力强及多向分化潜能,可用于实验研究。2、利用过筛法和IV型胶原酶消化法能成功提取、培养出符合实验要求的足细胞。3、AMD足细胞的损伤机制与足细胞m TOR过度激活有关,从而导致足细胞的功能紊乱。大鼠BMSCs可能通过抑制m TOR活性,保护阿霉素损伤足细胞,使nephrin蛋白的表达增加。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 阿霉素 足细胞 mTOR p-mTOR nephrin
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 第一部分 骨髓间充质干细胞的提取、培养及鉴定材料与设备12-23
• 引言12
• 材料与设备12-14
• 方法14-19
• 结果19-21
• 讨论21-22
• 结论22-23
• 第二部分 大鼠原代足细胞的提取、培养及鉴定材料与设备23-30
• 引言23
• 材料与设备23-25
• 方法25-27
• 结果27-28
• 讨论28-29
• 结论29-30
• 第三部分 骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤足细胞m TOR的影响材料与设备30-42
• 引言30
• 材料与设备30-33
• 方法33-37
• 结果37-40
• 讨论40-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 综述46-53
• 参考文献50-53
• 致谢53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 贾苗;张益民;赖德源;;大鼠足细胞的原代培养及鉴定[J];第三军医大学学报;2010年23期

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3 洪亦眉;陈朝红;;足细胞损伤的病因和发病机制[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2009年01期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 罗流涛;骨髓间充质干细胞对阿霉素大鼠足细胞骨架F-actin的影响及机制探讨研究[D];福建医科大学;2013年

  本文关键词：骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤足细胞mTOR的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：489974