活性维生素D对高糖环境下小鼠足细胞巢蛋白表达的影响

发布时间：2017-07-04 13:13

  本文关键词：活性维生素D对高糖环境下小鼠足细胞巢蛋白表达的影响

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【摘要】：目的:1.探讨梯度糖浓度以及高糖环境下不同时间点对小鼠足细胞巢蛋白(nestin)表达的影响;2.探讨活性维生素D对高糖环境下小鼠足细胞nestin表达的影响,为其临床防治DKD提供理论依据。方法:1.本研究采用体外培养永生化小鼠足细胞,将对数生长期的足细胞分为实验组(分为梯度糖15,25,35mmol/l组)、正常糖(糖5mmol/l)组、甘露醇对照组(即甘露醇30mmol/l+糖5mmol/l),分别作用24、48、72h,应用CCK-8法检测各组的细胞活性;2.将分化成熟的足细胞分为实验组、正常糖组和甘露醇对照组,免疫细胞化学检测nestin在足细胞中的表达;3.将分化成熟的足细胞分为梯度糖浓度组及不同的时间点,应用Western blot及RT-PCR半定量检测nestin蛋白水平及其mRNA水平的表达情况;4.将分化成熟的足细胞,分为正常糖组、高糖组、甘露醇对照组、高糖+活性维生素D(10-7,10-8,10-9mol/l)组,应用Western blot及RT-PCR半定量检测nestin蛋白水平及其mRNA水平的表达情况。结果:1.足细胞在33℃、10U/mlγ-IFN的允许条件下呈增殖状态,在37℃、无γ-IFN非允许条件下,细胞逐渐分化成熟,停止增殖;2.随着糖浓度的增加足细胞活性呈下降趋势(p0.05);3.免疫细胞化学显示,nestin在足细胞胞浆中表达;4.Western blot及RT-PCR结果表明,随着糖浓度的增加,nestin蛋白水平及其mRNA水平表达均明显降低(p0.05);随着高糖诱导时间的延长,nestin蛋白水平及mRNA水平表达呈显著降低趋势(p0.05);5.Western blot及RT-PCR结果表明,高糖+活性维生素D组较高糖组小鼠足细胞nestin蛋白水平及其mRNA水平的表达均增高(p0.05)。结论:1.足细胞在高糖环境下活性明显降低;2.高糖环境下足细胞nestin蛋白及其mRNA的表达,呈浓度、时间依赖性的降低;3.活性维生素D能上调高糖环境下足细胞nestin蛋白及其mRNA的表达,从而发挥保护作用。
【关键词】：糖尿病肾病 足细胞 nestin 活性维生素D 骨化三醇
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-13
• 材料13-17
• 方法17-29
• 结果29-36
• 讨论36-41
• 全文结论41-43
• 参考文献43-50
• 综述：足细胞巢蛋白与糖尿病肾病50-60
• 参考文献56-60
• 附录60-61
• 个人简历61

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本文编号：517905