重组小鼠Parkin共同调节基因在昆虫细胞系统中的表达

发布时间：2017-07-21 00:03

  本文关键词：重组小鼠Parkin共同调节基因在昆虫细胞系统中的表达

  更多相关文章： Parkin共同调节基因 杆状病毒载体 昆虫细胞 真核表达 精子发生

【摘要】：目的:构建小鼠Parkin co-regulated gene(Pacrg)/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体,并在Sf9昆虫细胞中表达。方法:PCR扩增小鼠全长Pacrg编码c DNA序列,通过TA克隆、连接等方法将该基因插入到携带e GFP的供体质粒p Fast Bac1中,获得重组载体rp FBac-Pacrg-GFP,然后转化到DH10Bac宿主菌中。筛选获得的重组杆状病毒载体r Bacmid-Pacrg-e GFP经脂质体转染至Sf9昆虫细胞中,荧光显微镜及Western印迹检测分析重组蛋白。结果:经测序及酶切鉴定显示构建的Pacrg/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体正确,Western印迹结果显示PACRG/e GFP融合蛋白在Sf9昆虫细胞中表达且携带绿色荧光。结论:成功构建了Pacrg/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体,且该重组蛋白在Sf9昆虫细胞中大量表达,为进一步研究PACRG蛋白的结构及其在精子发生中的调控作用奠定了基础。
【作者单位】： 武汉科技大学医学院公共卫生学院;武汉市职业病防治院;Department
【关键词】： Parkin共同调节基因 杆状病毒载体 昆虫细胞 真核表达 精子发生
【基金】：国家自然科学基金(81300536,81571428,81502792) 湖北省卫生和计划生育委员会青年人才项目(WJ2015Q026)~~
【分类号】：R698.2;Q78
【正文快照】：

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本文编号：570543