KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

发布时间：2017-07-26 18:25

  本文关键词：KLF4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

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【摘要】：膀胱癌在世界范围内有较高的发病率,在所有恶性肿瘤中排名第五位。同时膀胱肿瘤也是泌尿外科发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,其发病率逐年上升,严重威胁人类健康。超过95%的膀胱恶性肿瘤来源于尿路上皮细胞。膀胱癌根据其生长方式分为浅表性及浸润性生长,在所有膀胱癌病例中,大部分为腔内生长的浅表性肿瘤,目前广泛应用的治疗方式主要为经尿道膀胱肿瘤切除术,即使辅以膀胱灌注化疗,其复发率仍然很高。术后复查进展为浸润型膀胱癌的几率约为14~45%。手术治疗浸润性膀胱癌主要术式为膀胱部分切除及根治性肿瘤切除术,手术范围广,部分患者需终身携带造瘘管,严重影响患者生活质量。且术后复发率仍较高,约为50~70%,50%的患者术后4~5年内死亡。因此膀胱癌的早期诊断对提高治疗效果降低肿瘤死亡率有重要意义。目的:本实验通过对正常膀胱粘膜组织及临床病理因素不同的膀胱尿路上皮癌组织标本进行研究,实验采用免疫组化SP法及免疫印记Western Blotting法,测定KLF4在正常膀胱粘膜组织及不同临床病理因素膀胱尿路上皮癌组织中的表达情况,结果进行统计学分析,目的在于揭示KLF4蛋白在膀胱尿路上皮癌组织中的表达情况,及KLF4在膀胱癌发生、发展及不同临床病理因素之间的关系。方法:组织标本来源:收集2013年11月~2015年1月石家庄市第一医院及解放军第260医院泌尿外科住院患者手术切除的51例膀胱癌组织及30例正常膀胱组织。51例膀胱癌组织均经病理证实为尿路上皮癌,根据2004年WHO膀胱癌分级标准,高级别21例,低级别30例,男性33例,女性18例,年龄24~79岁,平均年龄55.0岁。所有病例均为初次手术,术前未经任何放疗、化疗及免疫治疗。用于免疫组织化学SP法的标本(包括51例膀胱癌组织及30例正常膀胱粘膜组织)均经10%甲醛固定,固体石蜡包埋,4μm厚连续切片。用于免疫印记western blotting法的标本(包括30例膀胱癌组织及30例正常膀胱粘膜组织)于手术切除后立即于无菌条件下放入消毒后的Eppendof管内,放入液氮中运送至-70℃冰箱冻存备用。1免疫组织化学SP法(两步法):应用免疫组化SP法检测51例膀胱尿路上皮癌组织和30例正常膀胱黏膜组织的锌指转录因子KLF4蛋白的表达情况。计算KLF4在正常膀胱黏膜组织及不同临床病理因素的膀胱尿路上皮癌组织的表达水平,制成表格并填充数据,应用SPSS 19.0统计软件统计实验结果,比较KLF4在不同病理因素的膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱黏膜组织的表达情况,同时应用统计学方法验证KLF4蛋白在膀胱尿路上皮癌组织不同临床病理参数间的表达差异。以X2检验统计实验结果,以P0.05作为有显著统计学差异。2 Western Blotting检测:首先制备SDS-PAGE电泳凝胶,制备正常膀胱黏膜组织及膀胱尿路上皮癌组织标本,取上清液作为样品,进行蛋白含量测定。将KLF4蛋白样品按比例加入SDS上样缓冲液,100℃煮沸至蛋白变性,上样,室温60V SDS-PAGE稳压电泳持续3h。将蛋白转至PVDF膜。将PVDF膜置于5%脱脂奶粉封闭,进行一抗孵育及二抗孵育,最后用化学发光法检测蛋白。用Western blotting成像分析系统软件对结果进行定量分析。结果:免疫组化结果表明:KLF4在膀胱尿路上皮癌组织和正常膀胱粘膜组织中均有表达,KLF4大多呈弥漫失极性表达,呈棕黄色颗粒,位于胞质内,弥散分布,部分细胞出现胞核着色。KLF4在正常膀胱粘膜组织的阳性表达率为96.7%,在膀胱癌组织的阳性表达率为51.0%,KLF4在正常膀胱黏膜组织的表达强度明显高于膀胱尿路上皮癌组织。非浸润性膀胱癌组织的KLF4表达强度明显高于浸润性膀胱癌组织。高级别膀胱癌组织的KLF4表达情况明显低于低级别膀胱尿路上皮组织。膀胱尿路上皮癌组织的KLF4表达情况在年龄、性别、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移及远处转移等因素下无显著差异。Western blotting区带定量分析表明,在60例配对的膀胱尿路上皮癌及正常膀胱粘膜组织中,所有正常膀胱粘膜组织均有较强的KLF4表达,24例膀胱癌组织有KLF4表达,6例未见表达。正常膀胱粘膜及膀胱尿路上皮癌的电泳结果见Fig.3。通过比较KLF4与β-actin条带密度比值来确定组织中KLF4的表达情况,并对结果进行t检验,结果显示正常组织的表达比配对的癌组织明显增强,具有显著性统计学差异(P0.05)(见Table 3),说明KLF4在膀胱癌的发生、发展过程中可能起到抑制作用。由于样本量较少,尚未应用Western Blotting验证KLF4在不同临床病理因素间的表达情况比较。结论:1 KLF4蛋白在膀胱尿路上皮癌组织的表达显著低于正常膀胱粘膜上皮组织;2 KLF4蛋白在低级别膀胱癌组织的表达显著高于高级别膀胱癌组织;3 KLF4在浸润性膀胱尿路上皮癌组织中的表达显著低于非浸润性膀胱癌组织;4实验证实KLF4与膀胱尿路上皮癌的发生、发展关系密切,发挥抑癌基因的作用。
【关键词】：膀胱尿路上皮癌 KLF4 免疫组化 免疫印记
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-12
• 材料及方法12-15
• 结果15-17
• 附图17-19
• 附表19-21
• 讨论21-25
• 结论25
• 参考文献25-30
• 综述 膀胱癌发生发展机制及 KLF4 蛋白的研究现状30-43
• 参考文献40-43
• 致谢43-44
• 个人简历44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王婧;刘瑛;易宇欣;张华莉;刘梅冬;肖献忠;邓恭华;;Kruppel样因子4过表达对C_2C_(12)肌原细胞中热休克蛋白25表达的影响[J];中国动脉硬化杂志;2006年10期

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本文编号：577749