3T3-L1前脂肪细胞移植对PCOS小鼠卵巢的作用及高胰岛素和高睾酮对体外培养人脂肪干细胞的生物学效应
本文关键词：3T3-L1前脂肪细胞移植对PCOS小鼠卵巢的作用及高胰岛素和高睾酮对体外培养人脂肪干细胞的生物学效应
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【摘要】：研究目的:本研究将绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)标记的3T3-L1前脂肪细胞移植入多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)小鼠模型,追踪3T3-L1前脂肪细胞在小鼠体内的表达,并观察小鼠卵巢的卵泡数目、大小及成熟度等推测小鼠的排卵情况,以探讨3T3-L1前脂肪细胞对PCOS小鼠的治疗作用。并通过提取人脂肪干细胞,体外培养及鉴定,检测在高胰岛素及高睾酮情况下对人脂肪干细胞的影响,为临床上对PCOS患者的治疗提供一种新的思路和方法。研究方法:1.实验动物选用SPF级雌性C57/BL6小鼠,23日龄。购买后1周适应光照周期,自由饮水、摄食饲养。实验动物分为空白对照组(Wild-type,WT):正常未处理小鼠;多囊卵巢综合征组(PCOS):建立PCOS模型后不作处理;尾静脉注射组(Intravenous,IV):建立PCOS模型成功后通过尾静脉注射3T3-L1前脂肪细胞悬液。2.通过慢病毒转染的方法获得GFP标记的3T3-L1前脂肪细胞,调整细胞浓度为1×106/ml,将0.2ml细胞悬液通过尾静脉注入小鼠体内,第二天重复注射1次,分别于植入后的1周及1个月取小鼠卵巢行冰冻切片,在荧光显微镜下观察3T3-L1前脂肪细胞的卵巢归巢情况。3.植入脂肪干细胞后的1周及1个月,取小鼠卵巢组织进行固定、包埋、切片,行HE染色后进行病理组织形态学观察小鼠卵巢形态、结构及卵泡数目的变化。4.取正常健康妊娠孕妇行剖宫产术时皮下脂肪组织,分离、培养及鉴定脂肪干细胞,用高浓度(10-4mol/L)、中浓度(10-5mol/L)、低浓度(10-6mol/L)的睾酮及胰岛素处理脂肪干细胞,运用Western Blot检测脂肪干细胞中PPARγ及a P2表达的变化。5.采用SPSS 17.0分析软件对实验数据进行统计分析,PPARγ、a P2的表达量及小鼠排卵前卵泡的数目用sx?表示,多组间采用方差分析组间差异(one-way ANOVA),以P㩳0.05作为差异有统计学意义的标准。结果:1.通过慢病毒转染的方法可以得到稳定携带GFP(+)基因的3T3-L1前脂肪细胞,并可以用于动物体内的细胞追踪。2.3T3-L1前脂肪细胞移植PCOS小鼠模型可以观察到卵巢内3T3-L1前脂肪细胞的归巢现象。3.PCOS小鼠卵巢内成熟卵泡减少,移植3T3-L1前脂肪细胞后1周及1个月小鼠排卵前卵泡数量增加,但移植后1周排卵前卵泡数量与对照组相比无统计学意义(P0.05),移植后1个月排卵前卵泡数量与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。4.通过对人脂肪组织的消化培养我们成功建立了人脂肪干细胞培养体系。5.高胰岛素及高睾酮会对脂肪干细胞培养体系的分泌活动产生影响,药物浓度越高PPARγ和a P2表达越低,高浓度组、中浓度组、低浓度组和空白对照组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.3T3-L1前脂肪细胞可以改善PCOS小鼠卵巢的功能,对PCOS有一定的治疗作用。2.高胰岛素和高睾酮可以在脂肪干细胞水平影响脂肪内分泌的调节作用。
【关键词】：多囊卵巢综合征 3T3-L1前脂肪细胞 脂肪干细胞 过氧化物酶增殖物激活受体γ 脂肪酸结合蛋白
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.75
【目录】：
- 中文摘要3-5
- 英文摘要5-9
- 前言9-12
- 第一部分 3T3-L1前脂肪细胞对多囊卵巢综合征小鼠模型的作用12-22
- 1 研究对象12-13
- 2 实验材料13-14
- 3 实验方法14-17
- 4 实验结果17-22
- 第二部分 脂肪干细胞在高胰岛素及高睾酮状态下的内分泌变化22-33
- 1 研究对象22
- 2 实验材料22-24
- 3 实验方法24-30
- 4 实验结果30-33
- 讨论33-36
- 结论36
- 展望36-37
- 参考文献37-42
- 英文缩略词42-43
- 研究生在读期间发表论文情况43-44
- 致谢44
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，本文编号：1021749
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