siRNA干扰AT1R基因调控链脲佐菌素诱导NIT-1细胞凋亡的实验研究

发布时间：2017-10-13 01:31

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【摘要】：目的用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT-1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因,探讨其对链脲佐菌素(STZ)诱导的胰岛素瘤细胞凋亡的影响。方法针对小鼠AT1R基因,设计并合成3对siRNA序列,脂质体法转染至NIT-1细胞,荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率,Real-time PCR检测AT1R mRNA表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果;分4组:空白组不予任何干预,STZ组予5 mmo L/L STZ干预30 min,si-AT1R组予40 nmol/L si-AT1R转染24 h,si-AT1R+STZ组予40 nmo L/L si-AT1R转染24 h后5mmo L/L STZ干预30 min;Real-time PCR检测Caspase-3 mRNA表达量,Hoechst33342染色荧光显微镜和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 40 nmol/L siRNA转染的荧光强度最强,转染后AT1R mRNA表达量明显下降,si-AT1R-2转染24 h的沉默效果最佳(92.20%);Caspase-3 mRNA表达量:STZ组与空白组比增加了2.37倍(P0.05),si-AT1R+STZ组与STZ组比减少了11.28%,但差异无统计学意义;细胞凋亡率:STZ组与空白组比增加了3.27倍(P0.05),si-AT1R+STZ组与STZ组比减少了26.82%(P0.05)。结论本研究建立了稳定的胰岛细胞AT1R基因沉默模型;RNA干扰沉默胰岛细胞AT1R基因可通过下调Caspase-3mRNA表达量降低STZ诱导的细胞凋亡率,提示AT1R介导了STZ诱导的胰岛细胞凋亡过程。
【作者单位】： 广西医科大学第一附属医院内分泌科;广西医科大学病理生理学教研室;中国人民解放军第三0三医院移植医学研究院;
【关键词】： RNA干扰 胰岛素瘤细胞 细胞血管紧张素Ⅱ型受体 链脲佐菌素 凋亡
【基金】：广西自然科学基金资助项目(编号:2013GXNSFAA019202,2013GXNSFAA019253)
【分类号】：R587.1
【正文快照】： 糖尿病患者在发病早期就已存在胰岛β细胞功能损伤,主要表现为细胞凋亡增加[1]。减少细胞凋亡,保护胰岛β细胞功能可从根本上减少新发糖尿病的风险[1-2]。使用肾素-血管紧张素系统(RAS)阻断剂可以减少新发糖尿病的发生[3],但具体机制不清。链尿佐菌素(STZ)是目前使用最广泛的

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本文编号：1022094