调控Nampt在糖尿病肾病炎症—纤维化中对波形蛋白表达的影响
发布时间：2017-10-14 17:37
本文关键词：调控Nampt在糖尿病肾病炎症—纤维化中对波形蛋白表达的影响
更多相关文章： 糖尿病肾病 炎症 纤维化 Nampt VIM
【摘要】：目的:探讨内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶(endogenous Nampt)在糖尿病模型小鼠肾小球纤维化(glomerular fibrosis,GF)中对波形蛋白(Vimentin,VIM)表达的影响。方法:应用糖尿病动物模型,制备肾脏组织切片,应用免疫共聚焦和免疫荧光进行蛋白表达的定位分析,分别评价肾脏肾小球细胞中Nampt和VIM的表达情况;根据高浓度葡萄糖(200 mmol/L)对肾小球系膜HBZY-1细胞氧化应激的严重程度进行分组(1组(200 mmol/L高糖组)、2组(200 mmol/L高糖组+FK866组)、3组(200 mmol/L高糖组+NMN组)、4组(200 mmol/L高糖组+FK866+NMN组);对照组分别为:5组(0.56mmol/L葡萄糖)及6组(0.56 mmol/L葡萄糖+FK866)和7组(0.56 mmol/L葡萄糖+NMN)),通过免疫荧光方法检测肾小球系膜细胞中Nampt和NF-κB、Sirt1表达,分析它们的相互关系,并通过免疫印迹方法对各相关蛋白的表达进一步再确认,研究内源性Nampt与肾小球前纤维化因子VIM表达的作用机制。结果:糖尿病组肾小球呈明显萎缩,严重糖尿病组小鼠的肾小球细胞内随着Nampt表达的增加,VIM表达也明显增加;随着时间的延长(0-5d)细胞内Nampt表达增加,同时NF-κB的表达也随之升高,而细胞内的Sirt1表达却明显减少(p㩳0.01)。随着Nampt表达的减少,VIM呈现表达明显减少趋势,NMN的干预也起到了相同的作用。结论:在肾脏纤维化过程中,Nampt通过NF-κB和Sirt1的相互作用可以调控VIM的表达,从而影响肾脏的炎症纤维化进程。
【关键词】：糖尿病肾病 炎症 纤维化 Nampt VIM
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：
- 中文摘要5-7
- ABSTRACT7-9
- 英汉缩略词对照表9-10
- 前言10-12
- 1 材料与方法12-21
- 1.1 实验动物模型、细胞株及分组12-13
- 1.1.1 胰岛素基因突变型糖尿病模型小鼠12
- 1.1.2 细胞株及细胞株分组处理12-13
- 1.2 实验试剂13-14
- 1.3 常用仪器设备14-15
- 1.4 实验相关溶液配制15-17
- 1.5 实验方法17-21
- 1.5.1 肾脏组织免疫组织化学方法检测Nampt蛋白17
- 1.5.2 免疫共聚焦方法检测肾脏组织蛋白的表达17-18
- 1.5.3 蛋白免疫印迹法检测蛋白的表达18-19
- 1.5.4 统计学分析19-21
- 2 结果21-28
- 2.1 共聚焦检测糖尿病小鼠肾脏组织中蛋白的表达21-22
- 2.2 共聚焦检测高糖条件下肾小球系膜细胞内蛋白的表达22-26
- 2.3 蛋白免疫印迹法检测蛋白的表达26-28
- 3 讨论28-32
- 4 结论32-33
- 参考文献33-35
- 综述35-43
- 参考文献40-43
- 攻读学位期间发表的学术论文目录43-44
- 致谢44
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本文编号：1032313
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