促甲状腺激素对心肌细胞收缩功能的影响

发布时间：2017-10-21 04:18

  本文关键词：促甲状腺激素对心肌细胞收缩功能的影响

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【摘要】：目的:探讨亚临床甲状腺功能减退疾病中,升高的促甲状腺激素(TSH)对心肌舒缩功能的影响及其作用机制。方法:采用酶分解法及差速贴壁法提取纯净的原代大鼠心肌细胞。免疫荧光和western-blot方法用于TSH受体在原代大鼠心肌细胞表达的检测,激光共聚焦显微镜测定TSH浓度依赖性刺激中,心肌细胞对钙离子的释放。通过浓度和时间依赖性分组,采用实时定量PCR,western-blot方法检测TSH对心肌肌浆网Ca2+-ATP酶(serca2a),雷诺丁受体(ryanodine receptors)的表达影响。为明确TSH对serca2a调控机制,以不同浓度TSH分别作用于心肌细胞48h,western-blot检测PKA,P-PKA,PLN,P-PLN,serca2a表达;其次分别给予细胞20 umol/L H89,4umol/LTSH 24小时刺激,RT-PCR及western-blot方法测定各组serca2a,P-PLN含量。结果:1.证明了心肌细胞表面确有TSH受体的表达;2.TSH可抑制心肌细胞中钙离子的释放。3.RT-PCR检测显示serca2a,雷诺丁受体的表达量在TSH刺激下表现出明显的时间和浓度依赖性,即随着时间和浓度的增加,其表达量逐渐下降。4.Western结果示P-PLN,P-PKA蛋白表达量随着TSH浓度增加与作用时间增长而下降。5.依据不同刺激将细胞分组,分别为control组,H89组,TSH组,H89+TSH组,检测SERCA2a,P-PLN mRNA,蛋白表达量。观察发现,H89可明显降低SERCA2a,P-PLN表达量;TSH作用后也可使以上两种物质表达量下降,但趋势不及H89组。当H89与TSH共同作用时,SERCA2a,P-PLN表达量显著下降,其幅度与H89组基本一致,二者之间无统计学差异。结论:依据该现象可知,当出现亚临床甲状腺功能减退时,随着TSH的浓度增高以及病程的延长,可使心肌舒缩功能进行性下降。而且,TSH对serca2a的这种调控来自于PKA/PLN信号通路。
【关键词】：促甲状腺激素 原代大鼠心肌细胞 心肌肌浆网Ca~(2+)-ATP酶 钙离子 雷诺丁受体
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R581.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-20
• 1.原代大鼠心肌细胞的培养13-14
• 1.1 分离提取13
• 1.2 细胞纯化13
• 1.3 细胞计数13-14
• 2.FRTL-5，H9C2，CHO细胞株的培养及传代14
• 2.1 细胞培养14
• 2.2 细胞传代14
• 3.荧光定量PCR14-15
• 4.细胞蛋白提取及western-blot15-18
• 4.1 提取细胞蛋白15
• 4.2 测定蛋白浓度15-16
• 4.3 western-blot16-18
• 5.免疫荧光18
• 6.激光共聚焦检测心肌细胞内钙动态18-19
• 7.数据分析19-20
• 结果20-28
• 1.分离后的原代大鼠心肌细胞20
• 2.促甲状腺激素受体在原代大鼠心肌细胞上的表达20-22
• 3.细胞内钙成像22-23
• 4.TSH作用后Ryr2表达23
• 5.TSH刺激后心肌细胞中serca2a的表达23-25
• 6.TSH对serca2a表达的抑制作用通过PKA/PLN通路实现25-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-34
• 文献综述34-40
• 文献综述参考文献37-40
• 致谢40-41
• 个人简历41

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本文编号：1071227