血糖波动对糖尿病大鼠周围神经病变的影响

发布时间：2017-10-24 20:07

  本文关键词：血糖波动对糖尿病大鼠周围神经病变的影响

  更多相关文章： 血糖波动 神经病变 氧化应激 NF-KB 炎症因子

【摘要】：背景与目的糖尿病(diabetes mellitus,DM)并发症的发生发展不仅与血糖整体水平升高有关,而且与血糖波动密切相关。血糖波动与糖尿病大血管并发症、糖尿病肾病及糖尿病视网膜病变的相关性及其机制研究被相继报道,而糖尿病神经病变(diabetic neuropathy,DN)与血糖波动的相关报道局限于临床发现,但其具体作用机制尚未明确。Ceriello A等研究者临床发现波动高血糖较稳定高血糖更能引起糖尿病患者的血管内皮损伤并升高氧化应激水平,参与心血管病的形成和发展;动物实验发现血糖波动可以增加糖尿病大鼠炎性因子的表达,加速糖尿病肾病的发生和发展。在糖尿病神经病变病因学机制研究中,氧化应激及神经炎症起到关键的作用。血糖波动对神经病变的影响如何,氧化应激和神经炎症在其中的作用如何?为此,本实验建立糖尿病血糖波动模型(diabetic fluctuant glucose rat model,DF)来探讨血糖波动对糖尿病外周神经病变的影响及氧化应激和炎症反应在其中所起到的作用。方法1糖尿病血糖波动大鼠模型的建立选择2月龄SD大鼠55只,体重(200-220)g,随机抽取15只大鼠作为正常对照组,余下一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60mg/kg,72小时后尾尖采血测大鼠随机血糖,血糖≥16.7mmol/L表示糖尿病模型成功。取一半数量的糖尿病大鼠于每天(8:00am,14:00pm)腹腔注射葡萄糖液2g/Kg,于每天(8:30am,14:30pm)腹腔注射普通胰岛素(20U/Kg)制备糖尿病血糖波动模型,血糖波动组12周内每天血糖波动模式相似,且糖化血红蛋白(Hb A1c)与糖尿病高血糖组无显著差异,则说明血糖波动模型造模成功。另取一半数量的糖尿病大鼠于每天同时间腹腔注射等量的生理盐水,即为糖尿病持续高血糖组。2实验分组正常对照组:NC组持续高血糖组:DS组波动高血糖组:DF组3三组大鼠一般情况、血糖水平及波动性评估在实验造模过程中,注意观察各组大鼠摄食、饮水、尿量、毛色及活动量,12周末测三组大鼠体重。每周检测一次三组大鼠全天7个时间点血糖,分别是(08:00、08:30、10:00、14:00、14:30、16:00、20:00)。用于计算平均血糖(mean blood glucose,MBG),血糖标准差(standard deviation of blood glucose,SDBG),最大血糖波动幅度(largest amplitude of glycemic excursions,LAGE)量化血糖波动。并于12周末颈内静脉采血测定糖化血红蛋白用于大鼠血糖水平的评估。4坐骨神经传导速度(motor nerve conduction velocity,MNCV)测定12周后麻醉大鼠,分离大鼠坐骨神经,肌电图与诱发电位测定仪测三组大鼠的坐骨神经MNCV。5坐骨神经电镜观察按照电镜检查常规制片,于透射电子显微镜下观察坐骨神经超微结构并摄片。6坐骨神经NF-k B(Nuclear factor-k B)免疫组化检测12周后用免疫组织化学法在光学显微镜下观察大鼠坐骨神经中NF-kB的表达。7氧化应激标志物及炎症因子的检测血糖波动组造模12周后,黄嘌呤氧化酶法测定坐骨神经超氧化物歧化酶(superoxyde dismutase,SOD)活性,硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平,具体操作严格按试剂盒说明书进行。8.采用SPSS17.0统计软件进行数据的统计学分析结果1.12周后NC组大鼠,摄食饮水量正常,毛发光洁,体态肥硕喜动;DF和DS组大鼠出现明显的多饮、多尿,毛乱无光泽,枯瘦恶动;DF组较DS组大鼠反应更加迟钝,毛发更加枯黄。根据每周一次全天7次血糖的监测,评估血糖稳定性示:NC组,DS组和DF组MBG依次为(5.37±0.8)vs(26.09±3.97)vs(24.42±7.61)mmol/L;SDBG依次为(0.61±0.11)vs(7.25±0.98)vs(11.35±1.86)mmol/L;LAGE依次为(2.13±0.23)vs(9.46±2.47)vs(21.33±4.68)mmol/L。与NC组相比,DS组和DF组的MBG、SDBG及LAGE显著增高,差异有统计学意义(均P0.05),DF组与DS组相比SDBG及LAGE进一步增高,差异有统计学意义(P0.05),DF组与DS组相比MBG有差异,但无统计学意义(P0.05)。12周末测3组大鼠Hb A1C示:(4.93±0.43)vs(11.79±1.40)vs(10.45±1.06)%。与NC组相比,DS组和DF组的Hb A1C显著增高,差异有统计学意义(均P0.05);DF组与DS组相比有差异,但无统计学意义(P0.05)。2.NC组,DS组和DF组坐骨神经MNCV依次为(52.69±4.39)vs(36.35±4.21)vs(31.96±2.99)m/s。DS组及DF组坐骨神经MNCV较NC组明显减慢,差异有统计学意义(P0.05),DF组较DS组进一步减慢(P0.05)。3.坐骨神经电镜示:NC组神经髓鞘,轴索结构完好;DS组神经髓鞘板层散乱,轴索内线粒体结构模糊不清;DF组神经髓鞘更加散乱、高度弯曲,轴索内线粒体肿胀模糊。4.坐骨神经免疫组化示:NC组,DS组和DF组坐骨神经积NF-kB平均光密度(average optical denisty,AOD)依次为:(84.67±5.94)vs(143.63±12.91)vs(209.17±17.44),与NC组相比,DS组及DF组坐骨神经NF-k B表达增多(P0.05),与DS组相比,DF组表达进一步增多(P0.05)。5.NC组,DS组和DF组MDA含量依次为(3.75±0.52)vs(5.90±0.49)vs(6.44±0.69)nmol/mgprot;SOD活性依次为(48.94±3.42)vs(36.02±4.32)vs(31.95±2.65)u/mgprot;TNF-a水平依次为(15.97±1.45)vs(26.53±2.25)vs(29.91±1.83)pg/mg;IL-6水平依次为(17.07±1.71)vs(25.31±2.03)vs(27.68±2.81)pg/mg。DS组及DF组坐骨神经SOD表达水平较NC组明显下降(P0.05),DF组SOD水平较DS组进一步降低(P0.05)。DS组及DF组坐骨神经MDA、TNF-a和IL-6表达水平较NC组明显增高(均P0.05),DF组MDA,TNF-a和IL-6水平较DS组进一步增高(均P0.05)。结论错时腹腔注射葡萄糖及胰岛素可成功建立血糖波动模型,血糖波动状态下,糖尿病大鼠神经病变加重,其机制可能与血糖波动可增加氧化应激、NF-k B及炎症水平相关。
【关键词】：血糖波动 神经病变 氧化应激 NF-KB 炎症因子
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2
【目录】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 中英文简写对照表14-15
• 前言15-16
• 材料和方法16-22
• 结果22-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-32
• 综述 神经炎症及氧化应激在糖尿病神经病变中的作用及治疗策略32-44
• 参考文献39-44
• 个人简历、硕士期间发表的学术论文44-45
• 致谢45

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本文编号：1090311