骨桥蛋白介导甲状腺相关眼病发病机制的研究

发布时间：2017-10-30 10:04

  本文关键词：骨桥蛋白介导甲状腺相关眼病发病机制的研究

  更多相关文章： 骨桥蛋白 甲状腺相关眼病 眼眶脂肪结缔组织 眼眶成纤维细胞

【摘要】：研究目的甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是弥漫性毒性甲状腺肿(Graves’disease,GD)最常见的甲状腺外表现,是累及眼眶的一种自身免疫性炎症性疾病。TAO具体发病机制十分复杂,至今仍不十分清楚,目前仍缺乏有效性治疗手段。目前证据表明眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)在TAO发病机制中起核心作用,参与TAO眼眶炎症、组织重塑和纤维化等多种病理过程。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,在一些自身免疫性疾病中发挥重要作用,具有多种生物学效应,可诱导成纤维细胞增殖,并且和组织纤维化有密切关系,最近研究发现,GD患者血清中OPN水平明显增高。为了探究OPN和TAO发病的关系,首先拟检测TAO眼眶脂肪结缔组织中OPN mRNA和蛋白表达情况,相关细胞因子mRNA表达情况以及和OPN mRNA表达量之间的关系。然后进行细胞实验,用OPN刺激TAO患者来源OFs,观察OPN对OFs增殖、移行以及对VEGF和CollagenⅠmRNA表达量的影响并探究其相关机制。研究方法1.OPN在TAO患者眼眶脂肪结缔组织中的表达情况活动期或稳定期TAO患者行眼眶减压手术时,取眼眶脂肪结缔组织,用行眼整形手术患者的正常眼眶脂肪结缔组织作为对照组,每组6例。实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和Western blotting法分别检测OPN mRNA和蛋白表达情况。然后通过RT-PCR检测相关细胞因子包括CD40L、CollagenⅠ、HAS2、NF-κB、CCL20、CD44、IFN-α和IFN-γmRNA表达情况,并和OPN mRNA表达量进行相关性分析。2.OPN对TAO患者OFs的影响及其作用机制探讨排除其它免疫性及炎症性疾病的TAO患者,行眼眶减压手术时,无菌条件下取眼眶脂肪结缔组织,组织块法培养OFs细胞。用OPN(5uM)进行预处理后,采用MTT法观察OFs增殖速率,并通过细胞划痕实验观察OPN对OFs移行的影响,再通过RT-PCR法检测OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表达量。同法培养OFs细胞,用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002(20uM)、MAPK/ERK信号通路抑制剂PD98059(20uM)、LY294002和PD98059(20uM+20uM)以及OPN单克隆抗体1A12(20μg/ml)分别联合OPN对OFs进行预处理,通过MTT法、细胞划痕实验和RT-PCR法分别观察对OFs增殖、移行速率的影响,并检测OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表达量的变化。结果1.活动期TAO患者眼眶脂肪结缔组织OPN mRNA和蛋白表达量及相关细胞因子mRNA表达量升高活动期TAO患者组眼眶脂肪结缔组织中OPN mRNA比稳定期TAO患者组和正常对照组明显升高,差异有统计学意义(P0.05);OPN蛋白表达量也明显增加,和稳定期TAO患者OPN蛋白表达量相比有统计学差异(P0.05),但和正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。活动期TAO患者组眼眶脂肪结缔组织中CD40L、CollagenⅠmRNA表达量比稳定期TAO患者组和正常对照组高,存在统计学差异(P0.05);HAS2 mRNA表达量也升高,但和稳定期TAO患者组和正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);活动期和稳定期TAO患者组CD44 mRNA表达量均低于正常对照(P0.05)。TAO患者OPN mRNA表达量和CD40L、CD44、HAS2 mRNA表达量之间存在明显的线性相关关系(P0.05)。2.OPN可促进OFs的增殖、移行速率,并增加VEGF和CollagenⅠmRNA表达量。经过OPN处理后,OFs增殖和移行速率加快,加入1A12和LY294002后,OFs增殖和移行速率变慢,而加入PD98059后对这些效应无明显影响。经OPN预处理后,OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表达量明显增加,加入1A12和LY294002后,VEGF和CollagenⅠmRNA表达量降低,加入PD98059后对两种基因mRNA表达量无明显影响。结论活动期TAO患者眼眶脂肪结缔组织OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高,同时CD40L、CollagenⅠ和HAS2 mRNA表达量也增加,且CD40L、CD44、HAS2mRNA表达量和OPN mRNA表达量之间呈明显的线性相关关系。OPN可以通过PI3K/Akt信号通路促进OFs增殖和移行,刺激OFs高表达CollagenⅠ和VEGF mRNA,说明OPN可能在活动期TAO发病机制中发挥重要作用,通过PI3K/Akt信号通路,协同CD40L、HAS2活化OFs以促进眼眶炎症的发生发展以及眼眶组织重塑和纤维化。
【关键词】：骨桥蛋白 甲状腺相关眼病 眼眶脂肪结缔组织 眼眶成纤维细胞
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R581;R771.3
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 骨桥蛋白在TAO眼眶脂肪结缔组织中的表达13-27
• 一、材料与方法13-19
• 二、实验结果19-24
• 三、讨论24-27
• 第二部分 骨桥蛋白对TAO眼眶成纤维细胞的影响及其作用机制研究27-39
• 一、材料与方法27-32
• 二、实验结果32-36
• 三、讨论36-39
• 全文总结39-40
• 参考文献40-48
• 综述48-60
• 参考文献52-60
• 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明60-61
• 致谢61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 罗清礼;;眼眶脂肪与甲状腺相关眼病[J];眼科;2005年06期

2 熊煜;;眼眶脂肪减压术治疗甲状腺眼病的疗效观察[J];齐齐哈尔医学院学报;2008年18期

3 李淑芬;用眶脂肪填充下睑粘连性瘢痕[J];实用眼科杂志;1986年04期

4 邱晓东,周兴亮,宫昔愿;结膜入路不去眶脂肪的眼袋整形术[J];中国美容医学;2000年03期

5 欧婉芳;;“双眼皮”成形术[J];广东医学;1964年S4期

6 何彦津,宋国祥,田文芳,肖利华,信惠敏;Tolosa-Hunt综合征CT和MRI扫描分析[J];实用眼科杂志;1993年11期

7 盛海斌;王计秋;蔡昌枰;焦秦;程瑜;;分泌卷曲相关蛋白在甲状腺相关眼病发病中的作用研究[J];内科理论与实践;2013年06期

8 孙豪;宋建良;姚建民;谭晓燕;范希玲;吴守成;沈向前;叶坡;;保留眶脂肪的睑袋整复术[J];中华整形烧伤外科杂志;1998年02期

9 杨景存;;一个简单的超声波 B 型扫描器[J];河南医学院学报;1975年01期

10 陈小剑;张志升;;眼袋分型及手术方法选择[J];现代医学;2008年01期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 郭同荣;;眶脂肪保留眶隔缩紧整复睑袋畸形[A];2013年全国激光医学学术联合会议暨2013年浙江省医学会整形美容学术年会论文汇编[C];2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 范浩;汉族人眶脂肪的应用解剖学研究[D];第二军医大学;2016年

2 娄恒;骨桥蛋白介导甲状腺相关眼病发病机制的研究[D];第二军医大学;2016年

，

本文编号：1117190